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牛奶中蛋白质的提取与鉴定 内蒙古农业大学 生物化学与分子生物学实验教学中心 ■实验原理 实验试剂 实验步骤 实验原理 牛乳和羊乳中含丰富的蛋白质,其中主要是酪蛋白 酪蛋白在羊乳中约占总蛋白量的3/4,牛乳中约占总蛋白 量的5/6。酪蛋白是一种含磷蛋白的不均一混合物。蛋白 质在其等电点pH溶液中溶解度降低。根据这个原理,将牛 乳的pH调整至48,即酪蛋白的等电点时,酪蛋白即沉淀 来。用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪,得到纯 的酪蛋白。所得酪蛋白供定性鉴定 除去酪蛋白的滤液中,尚含有球蛋白、清蛋白等多种 蛋白质。 实验试剂 醋酸钠缓冲液(0.2mol/LpH4.6) 2.米伦(Mion)试剂将汞100g溶于140m(密度1.42)的浓 硝酸中(在通风橱内进行)。然后加两倍量的蒸馏水稀释 3.95%乙醇 4.乙醚。 5.10%Nac 6.0.5%Na2CO3。 7. 0.Imol/LNaoH 8.0.2%HC 9.饱和氢氧化钙(Ca(OH)2)。 10.5%醋酸铅。 实验步骤 )酪蛋白的制备 取新鲜牛乳30m,放人100m烧杯中加热至40℃。加入 30m加热至同样温度的醋酸缓冲液,一边加一边摇动,并 用pH计检测,调整混合液的pH为4.8(实际中准确加入牛奶 与醋酸缓冲液体积相同时,可以不用调节pH)。冷却至室 温,继续放置5分钟,然后将溶液转入离心管中离心 3000/min,时间5分钟(注意离心时要对角配平),离心 后上清液保留做鉴定实验。所得沉淀物悬浮在约30m等量的 醇醚混合液中,搅匀,离心3000rmin,时间5分钟,弃清 液,所得沉淀摊在表面皿上,使醇醚混合液挥发。称其干重 计算其产量
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