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DB52/T ×××-200× PAGE 1 XXXX-XX-XX发布 贵州省市场监督管理局 发布XXXX-XX-XX实施刺梨良种组培苗繁育技术规程 贵州省市场监督管理局 发布 XXXX-XX-XX实施 刺梨良种组培苗繁育技术规程 Tissue Culture Seedling of Rosa roxburghii Fine Varieties Propagation Technical Regulation DB52/XXXX-XXXX DB52 贵州省地方标准 B05 PAGE 7 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准附录A为资料性附录。 请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由贵州省林业局提出。 本标准由贵州省林业标准化化技术委员会归口。 本标准起草单位：贵州省果树工程技术研究中心、国家林业和草原局刺梨工程技术研究中心、贵州省黔南州林业科技推广中心。 本标准主要起草人：樊卫国、欧国腾、陈红、潘学军、牛涛、刘少轩。 PAGE 6 刺梨良种组培苗繁育技术规程 1 范围 本标准规定了刺梨良种组织培养繁育过程中的良种选择、组培苗的繁育等方面的操作规程。 本标准适用于刺梨良种组织培养繁殖苗木生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 NY/T 393-2013 绿色食品 农药使用准则 3 术语和定义 NY/T 2306界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 刺梨良种 fine varieties of Rosa roxburghii 属于Rosa roxburghii Tratt 这一物种的、经人工定向选育的、具有稳定的遗传性状和丰产性及优良品质特征特性的、经省级或省级以上品种审定委员会审定通过的优良刺梨品种。 3.2 组培苗 tissue culture seedling 利用刺梨良种组织、器官或细胞在特定培养基上培养再生成植株进一步培养的无性刺梨良种苗木。 3.3 外植体 explant 从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。 3.4 消毒 disinfection 通过物理、化学方法去除物体表面大部分有害病原微生物（孢子除外）的过程。 3.5 灭菌 sterilization 通过物理、化学及一些理化方法杀灭一切微生物（包括孢子等）的过程。 3.6 接种inoculation 将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。 3.7 培养基 medium 根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求，人工配制的营养基质。 3.8 初代培养 explant ?culture 将植物体上分离下来的外植体进行最初培养的过程。 3.9 增殖培养 multiplication culture 将初代培养诱导产生的培养物重新分割，转移到新鲜培养基上继续培养的过程。 3.10 生根培养 rooting?culture 在组织培养中诱导无根组培苗生根、形成完整植株的过程。 4 良种选择 良种组培苗繁育的品种应是刺梨（Rosa roxburghii Tratt）这一物种的贵农1号、贵农2号、贵农5号、贵农7号刺梨等良种。 5 组培苗的繁育 5.1 外植体的选择 剪切刺梨良种树体上30d ~50d梢龄的、未木质化的带芽茎段作为外植体，外植体长度0.3cm ~0.5cm。 5.2 外植体消毒、灭菌 将外植体用自来水冲洗5min ~8min，移入75%的酒精中20秒 ~30秒，置入0.1%的升汞溶液中浸泡5min~8min，再用无菌水反复冲洗3次~5次。 5.3 初代培养 将消毒、灭菌好的外植体接种在1/2 MS+GA1.0mg/L+ 6-BA0.5mg/L + NAA 0.1mg/L 的培养基上进行初代培养，诱导腋芽萌发，获得初代芽丛。 5.4 增殖培养 将初代培养获得的萌芽切取后剪成单芽茎段，转接至MS（NH4NO3减半）+GA 1.0mg /L + 6-BA0.5mg /L ~1.0mg /L + NAA 0.1mg /L的培养基上进行芽丛增殖培养。 5.5 生根培养 将2cm ~3cm的增殖芽接种在1/2MS +6-BA0.3mg /L + NAA0.3mg /L + PP333（0.5mg /L~0.7mg /L）的培养基上