核酸电泳常见问题与解决方案.pdfVIP

问题 可能原因 解决方法 DNA Marker 降解 核酸酶污染 每次吸取时更换灭菌枪头， 勿将电泳缓冲液 带入管中；用后密闭 4 °C 保存 保存不当 4 °C 或 - 20°C 保存，避免多次反复冻融； 不可加热 DNA Marker 无法 琼脂糖质量差 使用质量可靠的琼脂糖制胶 正确分离 电泳缓冲液多次使用后失效 更换缓冲液 条带黯淡 核酸浓度过低 增加上样量 核酸降解 使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品 DNA条带被示踪染料掩盖 提高上样量； 避免使用与目的片段迁移率相 同的示踪染料 条带模糊或弥散 电泳缓冲液多次使用后失效 更换缓冲液 核酸部分降解 使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品 核酸样品纯度差，含有 DNA结合蛋 酚 / 仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂 白或高浓度的盐份 质 电压过低，电泳时间过长 根据凝胶大小和电泳缓冲液类型， 使用适当 的电压进行电泳 染色时间过长或拍照前放置过久， 电泳结束后及时观察、拍照 DNA条带弥散 条带缺失 DNA条带分子量过大 使用脉冲凝胶电泳 分子量接近的 DNA条带没有分开 选择适当的凝胶浓度进行电泳 电泳缓冲液使用不当 SD和 TBE缓冲液适于分析较小分子量的 DNA 片段，大片段分子不能完全分离； TAE缓冲 液不适于分离很小的 DNA片段 电泳时间过长或电压过高， DNA走 缩短电泳时间，调整电压 出凝胶 电极插反， DNA走出凝胶 正确连接电极方向 条带大小不正确 核酸降解或形成聚合物 加热处理或重新制备样品 λ DNA 酶切 Marker 的 cos 位点复 电泳前 65°C 加热 5 分钟，冰上冷却 5 分钟 性 以后再上样 相同分子量的 DNA片段由于结构或 判断 DNA分子是否有特殊结构， 如缺口、 超 序列的差异而有不同的迁移率 螺旋、二聚体等；富含 AT 碱基的 DNA迁移 率比同分子量富含 GC碱基的 DNA片段慢