蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量.pdfVIP

______________________________________________________________________________________________________________ 蒽酮 -硫酸比色法测定多糖含量 一 . 实验原理 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后 ，与蒽酮 (C14 H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。该物质在 620 nm 处有最大 吸收，在 150 μg/mL 范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很 高的灵敏度，糖含量在 30 μg 左右就能进行测定。 二 . 试剂器材 蒽酮试剂： 精密称取 0.1g 蒽酮，加 80% 浓 H2 SO4 100 mL 使溶解，摇匀。当日 配制使用； 葡萄糖标准液： 将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中， 12hr 后精密称取 100mg ，用蒸馏水定容至 100ml ； 其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶 (100ml 、50ml 、10ml) 、烧杯、具塞 试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。 三 . 操作步骤 葡萄糖标准曲线的制作 精品资料 ______________________________________________________________________________________________________________ 取 7 支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液， 每个 浓度做 2-3 个重复： 管号 0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液 /mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水 /mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 6mL ，振荡混匀，各管加完后一起置于沸 水浴中加热 15min 。取出，迅速浸于冰水浴中冷却 15min 。 在 625nm 波长下以第 1 管为空白，迅速测定其余各管吸光值。 以标准葡萄糖含量 ( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 样品的测定 将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取 2mL 置于干燥洁净试管中， 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 6mL ，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴 中加热 15min 。取出，迅速浸于冰水浴中冷却 15min ，每个浓度做 2-3 个重复。 在 625nm 波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线，由样 品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。 四. 注意事项 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物， 不但可测定戊糖与已糖， 且可 精品资料 ______________________________________________________________________________________________________________ 测所有寡糖类和多糖类， 包括淀粉、 纤维素等 （因为反应液中的浓硫酸可把多糖 水解成单糖而发生反应） ，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液 中全部可溶性碳水化合物总量。 在没有必要细致划分各种碳水化合物的