粘膜疫苗与活载体疫苗.pptxVIP

粘膜疫苗与活载体疫苗;粘膜免疫;粘膜免疫系统的组成;粘膜免疫系统存在着功能性分离的位点;粘膜免疫;肠道集合淋巴结(PP)对抗原的摄取;肠道集合淋巴结引发的IgA抗体反应;肠道集合淋巴结引发的IgA抗体反应;怎样针对粘膜免疫诱导位点抗原递呈和激活B, T细胞亚群最佳？;新的粘膜免疫佐剂— 神经肽;新的粘膜免疫佐剂— 神经肽;怎样针对粘膜免疫诱导位点抗原递呈和激活B, T细胞亚群最佳？;活载体疫苗;构建活载体疫苗的细菌载体; 释放粘膜疫苗的活载体－－沙门氏菌; 释放粘膜疫苗的活载体－－沙门氏菌; 释放粘膜疫苗的活载体－－沙门氏菌;卡介苗;卡介苗;共栖菌;目前用于表达外源病毒蛋白的载体病毒包括： 痘病毒 (痘苗病毒和宿主特异性痘病毒)、 腺病毒、 疱疹病毒、 小RNA病毒等;痘苗病毒具有宿主范围广、增殖滴度高、稳定性好、基因组容量大、含多个非必需区基因等特，因此，有利于进行基因工程操作，易于构建和分离重组病毒，适于插人多个外源基因 (可达0kb)，对插入的外源基因有较高的表达水平。 禽类痘病毒，由于用该病毒接种哺乳动物后，可以引起顿挫型感染，可以持续表达外源基因，并且不影响再次接种，日渐引起人们的关注。马立克氏病毒 gB基因的鸡痘活载体疫苗免疫效果极佳，免疫鸡用强毒攻击100%不发病，用超强毒株击90%不发病。病毒感染的广谱性，使其它痘苗病毒活载体疫苗的应用受到限制。;腺病毒载体对外源基因的容量较小，但它具有独特的优点: ①腺病毒比较安全。 ②腺病毒的靶细胞范围广，不仅能感染复制分裂细胞，而且能感染非复制分裂细胞。 ③腺病毒容易制备，对热不敏感，在适合的培养系统中呈高滴度增殖。 ④腺病毒可以在肠道及呼吸道繁殖，能诱导粘膜免疫，能制成药囊经口服途径接种以预防消化道及呼吸道感染。 (5)Ad2, Ad5等启动子较强，能高水平表达外源基因，特别是换以更强的启动子。;大多数腺病毒载体就是以Ad2和Ad5为基础构建的。重组腺病毒最大包装量约为野生型的105%，即外源基因的容量为20kb。 要插入大片段的外源基因就必须缺失一段腺病毒基因组。一般缺失位点有三处，即El, E3以及E4与反向末端重复之间的区域。 E3区可去除约2.2Kb构建成有复制能力的非缺陷型载体，允许插入的外源基因的最大长度为4.0Kb。一般不需要加基因表达调控元件，利用腺病毒本身的调节元件E3启动子在感染早期有效表达。;缺失E1区的人腺病毒必须在特殊的工程细胞中或非缺失的腺病毒辅助下才能复制增殖，因此称为病毒缺陷型载体。 “第一代腺病毒载体” (应包括E3或El + E3同时缺失) 目前应用最为广泛，由于缺失复制必须区，腺病毒只能在表达El基因产物的细胞中复制。 E1区可被去除5.5Kb，外源基因的插人容量可达7.5Kb。常规的构建方法是在E1区插入一个表达盒，其中包括启动子，外源基因和polyA序列。; 几乎所有的哺乳动物都存在疱疹病毒，某些疤疹病毒对畜牧业构成严重的危害，如伪狂犬病毒。 疱疹病毒的基因组较大，约150kb左右，预计含有约70个编码基因，其中至少有20%的基因是非必需基因，可容纳多个外源基因的插入。 许多疱疹病毒经粘膜途径感染，构建的载体活疫苗可经粘膜途径提呈抗原，诱导特异性粘膜免疫。 疱疹病毒活载体主要有单纯疤疹病毒、伪狂犬病毒、火鸡疤疹病毒、牛疤疹病毒I型、马疤疹病毒I型和传染性喉气管炎病毒等; 几乎所有的哺乳动物都存在疱疹病毒，某些疤疹病毒对畜牧业构成严重的危害，如伪狂犬病毒。 疱疹病毒的基因组较大，约150kb左右，预计含有约70个编码基因，其中至少有20%的基因是非必需基因，可容纳多个外源基因的插入。 许多疱疹病毒经粘膜途径感染，构建的载体活疫苗可经粘膜途径提呈抗原，诱导特异性粘膜免疫。 疱疹病毒活载体主要有单纯疤疹病毒、伪狂犬病毒、火鸡疱疹病毒、牛疱疹病毒I型、马疱疹病毒I型和传染性喉气管炎病毒等; 火鸡疱疹病毒活载体，是禽病毒基因工程研究中比较活跃的领域。 用该载体表达新城疫病毒的F和HN基因，由此构建的重组病毒接种鸡后，免疫鸡可抵抗新城疫病毒和马立克氏病毒强毒的攻击。 用该载体表达马立克氏病毒的gB基因，解决马立克氏弱毒苗不能冻干带来不便。 用伪狂犬病载体表达猪瘟病毒的El基因，免疫猪后既可预防伪狂犬病又可预防猪瘟。;小RNA病毒科中的脊髓灰质炎病毒 (PV) Sabin疫苗株在实际应用中证明安全、可口服，并且易增殖，感染滴度高。 可以将Pi区中的部分氨基酸缺失掉，代之以外源性病毒保护性抗原决定族，形成嵌合病毒粒子。 脊髓灰质炎病毒作为载体与前面所述的病毒活载体有所不同，前述载体系将外源性保护性抗原分泌到载体病毒粒子以外，而脊髓灰质炎病毒载体表达的外源性病毒蛋白则以嵌合的形式存在于载体病毒颗粒的表面。; 以负链RNA病毒，如流感病毒，作