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生物选修三·现代生物科技专题 【专题一·基因工程（DNA重组技术）】 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （2）功能：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是：质粒 裸露 结构简单 独立于细菌染色体之外 具有自我复制能力 双链环状DNA分子。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因（编码蛋白质的结构基因）的获取 1、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。 3.PCR技术扩增目的基因 （1）原理：DNA双链复制 （2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：有特殊结构的DNA片段 位于基因的首端 是RNA聚合酶识别和结合的部位 能驱动基因转录出mRNA （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞_ 一、常用的转化方法： ①将目的基因导入植物细胞：·农杆菌转化法（双子叶植物和裸子植物 幼苗时期） ·基因枪法（单子叶植物） ·花粉管通道法（受粉后 花粉管道未愈合前 剪去柱头 滴加DNA 转基因抗虫棉） ②将目的基因导入动物细胞：显微注射技术（受体细胞多是受精卵 “超级小鼠”） ③将目的基因导入微生物细胞：（作为受体细胞的原因是 繁殖快 多为单细胞 遗传物质相对较少 ，最常用的原核细胞是 大肠杆菌 转化方法：先用Ca2+处理细胞 使其成为感受态细胞 再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合 在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子 第四步：筛选含有基因表达载体受体细胞（依据是标记基因是否表达 放射性同位素 杂交带） 1.检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 DNA分子杂交技术。 2.检测 目的基因是否转录出了mRNA 用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。 3.检测目的基因是否翻译成蛋白质 从转基因生物中提取蛋白质 用相应的抗体进行抗原－抗体杂交。 4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。 （三）基因工程的应用 1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。 2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。 3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。 （四）蛋白质工程的概念 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质） 【专题二·细胞工程】 （一）植物细胞工程 1.理论基础（原理）：细胞全能性 　全能性表达的难易程度：受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞 2.植物组织培养技术 （1）过程：高度分化的组织―脱分化→薄壁细胞―→愈伤组织―再分化→幼根、芽―→小植株 胡萝卜组织培养：选取形成层（无毒） 培养基上避光培养 分化培养基 胚状体或丛芽） （2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞