UPLC与HPLC的不同之处.docxVIP

UPLC　 　 超高 效 液 相 UPLC 　 　 超高 效 液 相 色 谱 （ Ultra Performance Liquid Chromatography ， UPLC ） 色 谱 理 论 认 为 提 高 色 谱 柱 的 效 能 （ efficiency ）就能增 加 仪 器 的 解 析 度 （ resolution ）， 而 运 用 粒 径 低 于 2 μ m 的 小 颗 粒 无 疑 是 增 加 效 能 的 好 方 法 。 但 减 小 固 定 相 的 粒 度 以 增 加 色 谱 柱 效 能 一 直 是 色 谱 仪 器 科 学 的 瓶 颈 ， 因 为 小 颗 粒 不 仅 要 求 系 统 能 承 受 高 于 目 前 极 限 压 力 （ 比 如 6000psi/400bar ） ， 需 要 更 小 的 系 统 体 积 （ 死 体 积 ） ， 并 且 需 要 能 适 应 可 能 只 有 几 秒 峰 宽 的 高 速 检 测 器 。 　 　 Waters 公 司 在 传 统 HPLC 系 统 基 础 上 开 发 的 超 高 效 液 相 色 谱 （ ACQUITY Ultra PerformanceLC ） 系 统 突 破 了 色 谱 科 学 的 瓶 颈 ， 充 分 利 用 了 传 统 HPLC 望 尘 莫 及 的 小 粒 度 色 谱 柱 的 优 势 ， 使 色 谱 分 离 的 解 析 度 达 到 新 的 高 度 。 　 　 与传 统 的 高 效 液 相 色 谱 （ HPLC ） 相 比 ， UPLC 具 有 以 下 优 势 ： 　 　 1. 高 分 离 度 （ ultra resolution ） 　 　 根据 液 相 色 谱 分 离 的 解 析 度 方 程 ， 解 析 度 正 比 于 柱 效 能 的 平 方 根 　 　 而根 据 范 迪 姆 特 （ Van Deemter ） 色 谱 理 论 ， 柱 效 反 比 于 系 统 固 定 相 粒 度 大 小 。 UPLC 系 统 运 用 的 固 定 相 粒 度 能 达 到 1.7 μ m ， 根 据 上 述 方 程 ， 该 系 统 达 到 的 效 能 将 比 5 μ m 粒 度 系 统 高 70% ， 而 比 3.5 μ m 高 40% 。 　 　 2. 高 速 度 （ ultra speed ） 　 　 在保 证 得 到 同 样 质 量 数 据 的 前 提 下 ， UPLC 能 提 供 单 位 时 间 内 更 多 的 信 息 量 。 在 不 影 响 解 析 度 的 的 情 况 下 ， 小 粒 度 能 提 供 更 高 的 分 析 速 度 ， 同 样 也 能 使 柱 长 减 少 ， 根 据 Van Deemter 色 谱 理 论 ， 最 优 流 速 反 比 于 粒 度 大 小 。 柱 长 将 可 以 立 方 级 的 减 少 ， 而 且 可 以 在 3 倍 的 流 速 下 运 行 ， 相 同 的 解 析 度 情 况 下 ， 分 离 速 度 提 高 了 9 倍 。 　 　 3. 灵 敏 度 （ sensitivity ） 　 　 过去 对 于 提 高 灵 敏 度 的 研 究 大 都 集 中 于 检 测 器 上 ， 不 论 是 光 学 检 测 器 还 是 质 量 检 测 器 。 但 是 ， 其 实 运 用 UPLC 也 能 提 高 分 析 的 灵 敏 度 。 在 提 高 柱 效 的 同 时 ， 运 用 1.7 μ m 的 UPLC 系 统 比 5 μ m 和 3.5 μ m 的 系 统 灵 敏 度 分 别 提 高 了 70% 和 40% ， 而 在 柱 效 下 相 同 情 况 下 ， 能 分 别 提 供 3 倍 和 2 倍 的 灵 敏 度 。 　 　 在仪 器 工 艺 方 面 ， Waters ACQUITY UPLC ? 采 用 了 新 型 的 色 谱 填 料 及 装 填 技 术 ， 配 备 了 优 秀 的 超 高 压 液 相 色 谱 泵 、 自 动 进 样 器 、 高 速 检 测 器 ， 并 优 化 了 系 统 的 综 合 设 计 ， 使 仪 器 分 析 能 力 大 大 增 强 。 　 　 例如 ， 运 用 1.7 μ m 的 颗 粒 ， 相 对 于 5 μ m 颗 粒 ， 在 不 影 响 柱 效 的 情 况 下 ， 　 　 UPLC 能 提 高 柱 效 N ， 从 而 使 峰 宽 w 变 的 更 窄 ， 而 峰 高 却 增 加 了 ， 同 时 ， 由 于 UPLC 运 用 了 更 短 的 柱 子 （ 柱 长 L 更 小 ） ， 进 一 步 增 加 了 峰 高 。 因 此 ， 　 　 　 由于 UPLC 是 一 个 新 兴 的 领 域 ， Waters ACQUITY UPLC ? 系