动物性食品中口蹄疫病毒检验.pptVIP

知识目标： 了解口蹄疫病毒的生物学特性 掌握口蹄疫病毒检验方法 掌握口蹄疫病毒的卫生评价与处理 口蹄疫病毒 口蹄疫病毒（FMDV）是引起偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病，即口蹄疫的病原体。分类上属于小RNA病毒科、口蹄疫病毒属，有7个型（O、A、C、SATⅠ、SATⅡ、SATⅢ和AsiaⅠ）近80种亚型。其易感宿主包括家养和野生的牛、羊、猪、驼、鹿等。口蹄疫呈世界性分布，各大洲都曾发生过大流行，对畜牧业造成了极其严重的损失，并可影响到农业生产及人类的生活和健康。 口蹄疫病毒 患病动物的主要症状是发热、口腔粘膜、乳房皮肤上出现水疱（包括舌面、鼻镜、乳头、蹄叉、蹄冠及附蹄周围皮肤），水疱破溃可造成烂斑。严重者蹄壳边缘溃裂甚至脱落。猪患病时除鼻、唇、母猪乳头有水疱外，还可因蹄痛而跛行，甚至跪地爬行；仔猪多急性死亡。反刍兽的口涎较明显。恶性口蹄疫主要危害心脏，引起急性死亡，新生幼畜的急性死亡也是心肌炎所致。 口蹄疫病毒 人感染口蹄疫主要是由于饮食病乳、挤奶、处理病畜肉尸及其产品，通过直接接触或经外伤而感染，与动物有类似症状，以幼龄儿童较为严重，可因心肌麻痹而死亡。所以在口蹄疫流行时或屠宰加工口蹄疫病畜时，必须注意个人防护，严密消毒，非工作人员不许与病畜接触，以防感染和散毒。 一、生物学特性 FMDV为单股正链RNA，大小为8.5Kb。病毒粒子无囊膜，对脂溶剂不敏感。对酸碱较敏感，1%～2%的氢氧化钠溶液、4%碳酸钠1分钟可灭活病毒。但对其它化学消毒剂有抵抗力。对热较敏感，60℃15分钟、70℃10分钟和80℃1分钟即可杀灭病毒。 口蹄疫的传播中，空气传播有重要意义，并常常通过畜产品（肉、乳、皮毛等）及家畜为媒介而引起国际间的流行。 口蹄疫病毒极易发生变异，新的亚型不断出现。病毒各主型之间无交叉免疫性，同一主型内的各亚型之间交叉免疫力也较微弱。 FMDV可感染牛舌上皮、犊牛肾、犊牛甲状腺、仔猪肾、豚鼠肾、仓鼠肾、仔兔肾等原代细胞及仔猪肾、仓鼠肾传代细胞。常用的有BEIH（犊牛甲状腺细胞系）、IBR-2（仔猪肾传代细胞系）、BHK21（幼仓鼠肾细胞系）。也可用小鼠和豚鼠及鸡胚进行病毒的分离。 1.样品的采集与处理 样品采集 水疱皮：牛应采取舌表面水疱皮，亦可采蹄叉及蹄冠部水疱皮；猪采取蹄叉间、蹄冠部或鼻盘部水疱皮。水疱皮要求新鲜成熟、不要破裂、溃疡、易碎或腐败的。 水疱液：以灭菌注射器自未破的水疱中抽取水疱液，入灭菌玻璃瓶或试管中，每毫升水疱液加入青、链霉素各1 000单位。 屠宰病畜：采取肌肉、淋巴结、骨髓及内脏。 检样处理：将检样称重后，放在灭菌乳钵中剪碎，加入玻璃砂研磨，再用生理盐水或pH7.6磷酸盐缓冲液制成1：3的混悬液，按每毫升混悬液中加青、链霉素各1 000单位，放室温或4℃冰箱内2小时，每隔10分钟振荡一次，然后以3 000转/分离心沉淀10~15分钟，上清液即可为检验材料。 2.生物学试验 用途：用于病毒的分离、鉴定，测定动物的感染范围、进行中和试验和保护试验及确定不同毒株间的抗原关系等。 动物接种： 受试动物应无口蹄疫抗体。牛、羊的舌面可穿刺，齿龈、唇内可划痕涂擦病毒悬液1～3mL，接种部位应出现水疱。猪的蹄叉皮下或肌肉注射0.5～3mL悬液，几天后应在蹄叉、蹄冠和蹄踵等处产生水疱。 小白鼠的颈背侧皮下接种0.2mL悬液，1～3天出现进行性麻痹、呼吸因难、窒息。无症状可盲传2～3代，传代次数增加可使病程缩短。3～4日龄的小白鼠对FMDV最易感。 豚鼠对FMDV也敏感，可在趾部皮内注射0.2mL/只，3～7天会形成水疱。 乳兔与大白鼠皮下接种产生与小白鼠相似的症状。 鸡胚接种：9～11日龄的鸡胚可经绒毛尿囊膜、卵黄囊途径而感染，接种3～5天后绒毛尿囊膜水肿、实质器官出血，最后胚体呈现规律性死亡。 细胞培养：FMDV可在多种细胞上增殖，并产生典型的细胞病变（CPE）-细胞圆缩、核浓集、细胞最后崩解脱落。方法可参照常规的接种细胞技术：用生长良好的单层细胞，倒去营养液，加除菌的病毒悬液吸附，加维持液培养至出现CPE，无CPE时可盲传几代再确定最终结果。 利用动物进行交叉中和试验可以鉴别诊断口蹄疫、猪水疱病、水疱性口炎和猪水疱疹。即用已知的四种阳性血清与病毒悬液中和后接种猪只、以观察发病情况。 3.反向间接血凝试验 标准抗原和抗血清的制备：用口蹄疫O、A、C和AsiaⅠ型标准毒制备鼠组织毒抗原和豚鼠抗血清。猪水疱病（SVD）用猪水疱皮毒抗原和猪抗血清。 红细胞悬液及醛化：用ALsever氏液保存的绵羊红细胞悬液，以pH7.2,0.1moL/L磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤后，用2.5%戊二醛溶液进行醛化处理，如用双醛法，可再用3%甲醛处理制成10%悬液备用。 IgG的提取：FMDV和SVDV抗体血清用饱和硫酸铵