提质粒酶切验证.docVIP

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2010/11/24 根据跑胶结果初步认定:1,2,4,5为Pmd18Tvecter 认定8#可能是连接上的 认定3,6,7,9,12,13,16,17,19是同一样大的 认定10 14 15 18是大小一样的 认为11孔pmd18Tvector是自连的 注:14,15是同一管菌中提出来的,14是直接提的,15是用14的废液提的 选1作对照, 3,6,8,10,13,16,19用xba1做酶切 结果预期:为一个2490左右的片段,一个1068左右的片段37℃ Xba1 1μl BsaA 1ul Buffer m 1μl 2466Nagb-T 5μl H2o 2ul 最后一个孔是pet22b对照 所以只有一个有可能就是第六个孔对应的13032-nagB-pet22b 14# 拿来做hind 111酶切 结果预期:切下来一个762bp的片段和一个5482bp左右的片段 酶切体系37℃ HindⅢ 1μl. Buffer M 1μl. Atcc13032nagB-pet22b 5μl. H2o 3ul. 1,5孔为大小一样的质粒 2,4孔为大小一样的质粒 3,6孔为大小一样的质粒 选1 2 3 做xho1和Nco1双酶切 37℃ 预期一个一千多的片段一个5000多的片段 Xho1 1μl Nco1 1ul Buffer h 1μl An-pet15b 5μl H2o 2ul 酶切验证图切验证 2466nagb-t3# 2466nagb-t6# 2466nagb-t8# 2466nagb-t10# 2466nagb-t13# 2466nagb-t15# 2466nagb-t18# an表皮葡萄球菌-pet15b3# an表皮葡萄球菌-pet15b6# an表皮葡萄球菌-pet15b7# 13032nagb-pet22b14# 13032nagb-pet22b18# 经上图我们认为2466nagb-t10# 是正确的 其余的构建都不正确

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