β-内酰胺类抗生素高分子杂质测定法课件讲解.pptVIP

β-内酰胺类抗生素高分子杂质测定法; 第一节 β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质;β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质;内源性杂质：抗菌药物自身聚合产物。聚合物即可来自生产过程，又可在储存中形成，甚至在用药时使用不当也可产生。 抗生素聚合物的免疫原性通常较弱，但作为多价半抗原，可引发速发型过敏反应。? ;图1 水温引起阿莫西林干糖浆中高分子杂质含量的变化;β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质;青霉噻唑多肽： 制剂中的青霉噻唑多肽的分子量主要分布在3500～2400道尔顿左右，有青霉素的β-内酰胺环和多肽的伯氨基按亲核反应机理缩合而成，主要发生在发酵工艺中。样品在储存过程中，多肽类杂质残留的自由氨基仍与β-内酰胺反应，直至被饱和，反应速度和样品本身的水分含量及储存温度有关。;青霉噻唑蛋白的基本结构;青霉素聚合物： 1.反应仅和母核结构有关，侧链中的活性基团不参与反应。 一分子青霉素首先开环，形成一新的活性位点，并与另一分子青霉素聚合。 2.侧链参与的聚合反应 主要以氨苄青霉素为代表，反应时侧链上的氨基亲核攻击β-内酰胺抗生素的羰基碳原子，形成聚合物。 ;头孢菌素：头孢菌素中的高分子杂质主要是不同类型的聚合物。 1.只与母核结构有关的N型聚合反应 eg. 头孢噻吩、头孢呋辛、头孢哌酮等 2.侧链参与的L型聚合反应。 eg. 头孢氨苄、头孢拉定、头孢噻肟等 在碱性条件下，两种反应都可以发生。;β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质;2.聚合物类杂质：青霉素、头孢菌素不仅能形成聚合度不同的聚合物，许多样品还能同时发生不同机理的聚合反应。 3.形成的聚合物可发生不同程度的分（降）解反应，如开环等。 4.对以异构体形式存在的样品，同聚和异聚反应可同时发生。 5.实践中发现高分子杂质的种类及数量和生产工艺密切相关，如氨苄西林钠，溶媒法和喷雾干燥法的高分子杂质具有不同的特异性，且二者的聚合物含量明显不同。;β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质;2.头孢菌素的聚合物 固体状态下头孢菌素类产品聚合速度与含水量和贮存温度的关系密切。 贮存温???较低时，含水量差异对聚合物含量尽管有影响，但影响不大；但当贮存温度上升至37℃时，含水量差异对聚合物含量的影响十分显著。;β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质;β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质;第二节 高分子杂质分析方法;由于结构不同的高分子杂质通常有相似的生物学特性，如：均为过敏性杂质，因此，在药物质量控制中一般不需分别控制不同结构的高分子杂质含量，而只需控制药品中高分子杂质的总量。故根据分子量差异进行分离的凝胶色谱模式是简便易行的分离模式。 以葡聚糖凝胶Sephadex G-10 为基础的凝胶色谱分析方法，可简便地用于对各种β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质的分离、分析，并满足药品质量控制的需要。;高分子杂质分析方法;凝胶色谱系统的分离原理及特点;凝胶色谱系统的分离原理及特点;凝胶渗透色谱按分子大小分离原理图;凝胶过滤柱层析所用的基质是具有立体网状结构、筛孔直径一致，且呈珠状颗粒的物质。这种物质可以完全或部分排阻某些大分子化合物于筛孔之外，而对某些小分子化合物则不能排阻，但可让其在筛孔中自由扩散、渗透。 任何一种被分离的化合物被凝胶筛孔排阻的程度可用分配系数Kav（被分离化合物在内水和外水体积中的比例关系）表示。 ;实验证明， Sephadex G-10 凝胶可基本保证所有的β-内酰胺抗生素中的高分子杂质被排阻。 Kav = (Ve-Vo) / (Vt-Vo) Kav:分配系数；Ve：被分离物质洗脱体积； Vo：柱内凝胶床中颗粒间自由空间所占有的体积（外水体积）； Vt：柱内凝胶颗粒占有的体积与外水体积之和（柱床体积） 一般Kav≈0洗脱的组分视作高分子杂质。;外水体积（Vo） ：凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，即液体流动相体积； 内水体积（Vi） ：凝胶颗粒中孔穴的体积，即固定相体积； 基质体积（Vg） ：凝胶颗粒实际骨架体积。;洗脱体积（Ve） ：将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积。 一般是介于Vo和Vt之间的。 （1）对于完全排阻的大分子，由于其不进入凝胶颗粒内部，而只存在于流动相中，故Ve= Vo； （2）对于完全渗透的小分子，由于可以存在于凝胶柱整个体积内，故Ve= Vt； 分子量介于两者之间的分子，其洗脱体积也介于两者之间，但，有时也出现Ve＞ Vt，这是由于这种分子与凝胶的吸附作用造成的。;凝胶层析洗脱示意图;通常选用蓝色葡聚糖2000作为测定外水体积的物质。该物质分子量大（为200万），呈蓝色，它在各种型号