第六章细菌、病毒 2.ppt

高频转导（high frequency transduction,HFT）：用紫外线诱导gal+/gal-细胞裂解，所产生的溶菌产物将包含约一半正常的噬菌体和一半λdgal+转导噬菌体。这样的溶菌产物进行转导频率较高，故称为～。 当转导噬菌体内容物注入一个受体细胞后，形成一个部分二倍体，然后导入的基因通过重组，整合到宿主细菌的染色体上。 错误包装(1/1000机率) 同源重组 同源重组 噬菌体携带供体的染色体片段完全是随机的，也就是说，供体基因组中所有基因具有同等机会被转导形成部分二倍体，经交换和重组后，形成不同转导子。 各个标记基因转导频率大致相同，这种转导就是普遍性转导（general transduction）。 The mechanism of generalized transduction. ∵转导噬菌体——一般只有0.3%左右 噬菌体基因组大小相当于沙门氏菌的1% ∴普遍性转导频率很低，对每一个基因来说转导频率是有限的。 频率：1%×0.3%=3×10-5 如果细菌的两个基因之间距离大于噬菌体的染色体长度，一般不能同时进行转导，除非携带不同基因颗粒同时感染同一细菌细胞。 频率： 10-5 ×10-5=10-10 共转导或并发转导（cotransduction）：两个基因同时转导的现象。 如果两个基因始终是一起转导或同时转导频率较高，那么可以证明这两个基因是连锁的。两个基因共转导频率愈高，表明两个基因连锁愈紧密，相反，共转导频率愈低，则表明这两个基因距离愈远。 双因子转导（two-factor transduction）：每次观察两个基因的转导，通过每两个基因之间的共转导频率可以确定这些基因在染色体上的次序。 若要分析３个基因则需做３次双因子转导实验，才能确定这３个基因的次序。 假定这３次实验结果为：①a基因和b基因共转导的频率高；②a基因和c基因共转导频率也高；③ b和c基因的共转导频率很低，那么这３个基因的次序就应为b、a、c。 三因子转导（three-factor transduction ）分析，则只做一次实验就可推出３个基因的次序。 以普遍性转导噬菌体P1为例，测定大肠杆菌的leu（亮氨酸合成)、thr（苏氨酸合成）、azi(叠氮化钠抗性）三个基因的顺序。 每个选择的标记基因进行多次试验： 三个位点之间的连锁关系： 实验1： 2种可能排列： azi　leu　　　　　　 thr √ 　 leu　azi　　　　thr 实验2：肯定三个基因的顺序是： azi　leu　　　　　　thr 实验3： 　证明这一顺序，因为leu+和thr+片段之间从未携带有azir。 实验 选择的标记基因　 未选择的标记基因频率 1 2 3 　leu+ 　thr+　 　 leu+ thr+ 50%azir 2%thr+ 3% leu+ 0%azir 　0%azir 通过合转导关系求出两基因之间的物理距离： d=同一染色体上两基因之间的物理距离； L=转导DNA的平均长度； X=两个基因共转导的频率。 由以上公式可知： 　　转导DNA的平均长度约为１个病毒基因组的大小； 通过试验测知两个基因的合转导频率，就可估算出两个 基因间的物理距离。 通过3因子转导可以得到不同类型的转导子及其频率，显然频率最低的一类转导子是最难于转导的，因为它的产生需要同时发生的交换次数最多。这种转导子的3个基因中，两边的应为供体基因，中间的受体基因。 例如：大肠杆菌leu+arg+met+细胞作供体， leu-arg-met-作为受体，由P1噬菌体作为载体进行转导。最初选择的是leu+转导子，然后检查leu+转导子中其他两个基因被转导的情况，得到的转导子类型和数目如下： (1) leu+ arg- met- 453 (2) leu+ arg+ met- 114 (3) leu+ arg+ met+ 36 (4) leu+ arg- met+ 0