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判断骨髓有核细胞增生程度几种方法的比较 36现代检验医学杂志2005年9月第20卷第s期JModLabMed,September2005,Co1.20,No.5 判断骨髓有核细胞增生程度几种方法的比较 李早荣,丘文干,吴合军.,成军,孙长贵(1.中国人民解放军第一一七医院,浙江杭州310013; 2.广东企石医院;3.中国人民解放军83医院) 摘要:目的探讨和比较判断骨髓有核细胞增生程度几种方法的准确性.方法对临床206份抗凝骨髓标本采用直接定 量计数法和涂片染色后高倍镜视野观察有核细胞数;比较低倍镜法,成熟红细胞与有核细胞比值法,高倍镜视野法和直接 定量计数法,对骨髓有核细胞高,中,低值标本的测试精度.结果206份EDTA.K:抗凝的骨髓标本有核细胞直接定量计 数,结果介于(5.O～770.O)×1O./L之间,583.86×1O./L;其中男性骨髓标本120例,有核细胞介于(5.0~388)×1O./L之 间,579.4×1O/L,女性患者86例有核细胞介于(8.O～770)×10/L之间,594.2×10/L;高,中,低值骨髓标本有核细胞 直接定量计数法,变异系数(C)分别为0.061,0.061和0.096(平均CV0.073).4种方法,除方法1只能按五级增生法大 体估计外,其它二种方法高,.中,低值骨髓标本的平均CV分别为0.424,0.186.结论选用EDTA—K2抗凝骨髓并进行骨 髓有核细胞直接定量计数是必要的也是可行的,该法较目前国内传统方法准确性高,重复性好,便于操作,能满足现代临床 血液学诊断,治疗和预后的需要. 关键词:骨髓;有核细胞;增生程度;方法学比较 中图分类号:R446.1l3文献标识码:A文章编号:1671—7414(2005)05?036—03 骨髓有核细胞的数量是判断骨髓增生程度的 重要依据,传统的方法有低倍镜估计法和成熟红细 胞与有核细胞比值法Ll],常以极度活跃,明显 活跃,活跃,减低,明显减低五级报告,也有 将增生明显活跃和增生减低再各分为二级而以七 级报告],此类方法通常是在低倍镜或油镜检查 时大体确定.is3.高倍镜视野(HP)法[6],虽可提高 重复性,但由于各种型号显微镜视野面积有差 异口],也会造成各实验室间结果差异.因此,笔者推 荐先抗凝骨髓液,再用稀盐酸稀释,血细胞计数池 计数的方法,对骨髓有核细胞进行直接定量计数, 现将几种方法对比实验报道如下. 1材料与方法 1.1骨髓标本骨髓标本均为住院患者,由临床 医生按常规方法在患者髂前或髂后上棘抽取0.5 ml左右,立即放人事先准备好的含有EDTA?K. (含量约2～4mg/ml骨髓)抗凝剂的塑料小试管 内充分混匀,送检.抽取的骨髓液符合质量要求,共 206例,其中男120例,女86例,年龄2～84Y,平 埒年龄44.6Y.随机取骨髓有核细胞高(335.4× 10./L),中(148.5X109/L),低(13.3X10./L)值标 本各1份(高,中,低值结果均分别经10次直接定 量计数求均值确定),作为4种有核细胞增生程度 的方法学比较. 1.2试剂与仪器 1.2.1抗凝剂(100g/LEDTA—K2溶液):称取 EDTA—K2(J.T.BakerB.V.一Deventer—holland进 口)10g,溶解于蒸馏水并加至100ml,使用时在塑 料小试管内加入上述溶液2Ol,约可抗凝0.5ml 骨髓液. 1.2.2瑞氏一姬姆萨复合染色液:见文献[1]. 1.2.3有核细胞计数稀释液:1(v/v)盐酸溶液. 1.2.4显微镜:NiknALPHAPHOT一2YS2;血细 胞计数池:XB—K一25. 1.3方法 1.3.1低倍镜法:对经瑞氏?萨姆氏染色的骨髓涂 片,以1O×1O低倍镜在体尾部估计视野内有核细 胞多少,按极度活跃,明显活跃,活跃,减低,明显减 低五级报告.高,中,低值骨髓标本分别按上法观察 3O次作为统计学参数. 1.3.2成熟红细胞与有核细胞比值法(简称比值 法):油镜(10×100)下在涂片染色好的体尾部,红 细胞平布处,计数1000个成熟红细胞的同时计数 所看到的有核细胞数,求出比值.高,中,低值骨髓 标本分别按上方计数24次作为统计学参数. 1.3.3高倍镜视野法(简称高倍镜法):详见有关 文献. 1.3.4直接定量计数法(简称定量计数法):抽取 患者髂前或髂后骨髓液约0.5ml,立即放入含有 2Ol10g/dlEDTA.K2溶液的塑料小试管内混匀 抗凝.用微量加样器准确吸取抗凝骨髓液2Ol与 0.38ml稀释液混匀,数分钟后混匀吸取少量充人 血细胞计数池,计数中间1个大方格或5个中方格 内的有核细胞数,结果×0.2或×1,再×10,即为 ×1O./L内有核细胞数.高,中,低值骨髓标本分别 按上法计数3O