qtrap用户会之二mrm定量.pptVIP

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2019-09-12 发布于浙江
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qtrap用户会之二mrm定量.ppt

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MRM3, 在定量上增加选择性消除干扰; 建立置信度! 区别于3D离子阱的MS3,专用在定量方面, 故称为MRM3 分辨率与灵敏度关系图解分辨率/传输率 MRM on 4000 Q TRAP (Optimal CE)Pamaquin (10pg) in presence of Oxycodone (50ng) and Clonazepam (2.5ng) MRM on 4000 Q TRAP (CE 45eV)Pamaquin (100pg) in presence of Oxycodone (50ng) and Clonazepam (2.5ng) 为什么复合型四极杆-线性离子阱是不同的? 使用4000QTRAP的MRM3进行定量，其单位分辨率的选择特异性，相当于FWHH=0.03amu（MS2），干扰概率只有0.25%，而其灵敏度相对于MS/MS定量, 只降低2.5倍 MRM3 Quantitation using the QTRAP? 5500 system 10μg/kg in Matrix (MRM3: %CV5, accuracy 90-110% ) Calcitriol MRM vs MRM3 实例-克伦特罗 Clenbuterol analysis from Urine sample Calibration curves prepared from pooled matrix Subject 1 to 18 pooled to prepare standard calibration curve This mimics approach used in typical bioanalysis Total of 34 subject samples (including the 18 pooled together for calibration curve) were analyzed as individual samples at 3 levels of clenbuterol 0 pg/uL of clenbuterol (unspiked – blank) 0.5 pg/uL of clenbuterol (apporximate) Previous sample diluted 2 fold (0.25pg/uL) All Subject samples injected randomly Calibration curve injected in 4 replicates MRM – monitored 277-203 / 277-168 / 277-132 MRM3 – 277?203?168 / 277?203?132 * ? 2010 AB SCIEX * ? 2010 AB SCIEX MRM3 定量: 三级四极杆传统定量方法是MRM 典型的是单位质量分辨 (0.7 amu FWHH) (通常特异性足够) 不幸的是，仍然会有干扰如果能早期发现，还能修改方法，如果已经确认，将花费大量的时间和资源克服这个问题如何解决干扰问题消除干扰可以… 1. 色谱 2. 变换碎片离子 for MRM 3. 改变 CE 4. 提高母离子的选择性优点操作容易 LC 时间不受影响 LC 时间不受影响提高Q1分辨率容易做到缺点延长分析时间影响灵敏度影响灵敏度降低灵敏度当FWHH0.7降到0.1时，分辨率升高，但是灵敏度会损失50%以上 Finnigan 高分辨率的定量分析(H-SRM)，FWHH = 0.2，此时灵敏度损失20% 20 % Loss 70-75% Loss 0.06 amu FWHH Finnigan promotes Hi-Res Quantitation at 0.2 FWHH 使用4000 Q TRAP 进行定量分析，单位分辨率时MS3 的特异性，相当于 MS2 FWHH= 0.03 ~90% Loss For H-SRM 0.03 amu FWHH MS2的前体离子选择的分辨率达到FWHH0.03amu时，灵敏度损失超过90% 干扰概率: MS, MS/MS and MS3 vs. Resolution 100% 0.25% 0.03 amu …要得到与单位分辨率时MS3相同水平的定量分析特异选择性，MS2的前体离子选择的分辨率需达到FWHH0.03amu MS3 实验: Q1 分析 Q2 裂解 LIT 分离/裂解/贮存/扫描特异的定量通路消除干扰比提高Q1分辨率更通用定量由… Q0 Q1 q2 Q3 LIT MRM3 定量: 实验