雌激素对成骨细胞凋亡及相关因素表达影响的实验分析.docx

雌激素对成骨细胞凋亡及相关因素表达影响的实验研究研究生：唐孝明 雌激素对成骨细胞凋亡及相关因素表达影响的实验研究 研究生：唐孝明 导师：裴福兴教授 摘 要 目的：探讨雌激素对体外培养的大鼠成骨细胞凋亡和凋亡相关基因 Bcl一2、Bax和Fas表达的影响，为明确雌激素治疗骨质疏松的机理提 供依据。 方法：(1)体外培养新生sD大鼠颅骨成骨细胞，并从形态学、硷性磷 酸酶染色等方面予以鉴定。(2)取生长旺盛的第2．3代成骨细胞随机分 为对照组、血清饥饿组、血清饥饿+雌激素组、脂多糖组和脂多糖+雌激 素组等5组，每组细胞分别培养24、48、72小时、5天、7天、14天 后作检测。(3)上述5组细胞培养72小时后作吖啶橙染色、TUNEL染 色观察凋亡细胞的形态特征。(4)流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率， 并比较组间的差异性。(5)免疫组化方法检查各组细胞凋亡相关基因 Bcl一2、Bax和Fas的表达情况，比较组间各基因表达的差异性。 结果：(1)培养出来的细胞具有成骨细胞的形态特征，硷性磷酸酶染色 为阳性。(2)吖啶橙染色荧光显微镜观察，血清饥饿和脂多糖组细胞见 细胞核呈黄绿色浓染、并可见凋亡小体，血清饥饿+雌激素组和脂多糖 组+雌激素组细胞正常。(3)TUNEL染色见血清饥饿和脂多糖组细胞核 内有紫兰色颗粒的凋亡细胞，而血清饥饿+雌激素组和脂多糖组+雌激素 组该类细胞明显减少。(4)流式细胞仪检测发现血清饥饿和脂多糖组细 胞凋亡率显著升高，血清饥饿+雌激素组和脂多糖组+雌激素组细胞凋亡 率显著降低。(5)血清饥饿和脂多糖组Bax和Fas的表达显著升高，而 血清饥饿+雌激素组和脂多糖+雌激素组Bax和Fas的表达显著降低，且 Bcl—2的表达显著升高。 结论：雌激素能抑制血清饥饿和脂多糖诱导的大鼠成骨细胞凋f2；血清 结论：雌激素能抑制血清饥饿和脂多糖诱导的大鼠成骨细胞凋f2；血清 饥饿和脂多糖通过增加成骨细胞Bax和Fa s的表达促进成骨细胞凋亡， 雌激素能抑制成骨细胞Bax和Fas的表达，并能促进Bcl一2的表达从而 抑制血清饥饿和脂多糖诱导的大鼠成骨细胞凋亡。 关键词雌激素成骨细胞 细胞凋亡基因 EFFECT EFFECT OF ESTOGEN ON OSTEOBLAST APOPTOSIS AND EXPRESSION OF RELATED GENES Postgraduate：Tang Xiao Ming Tutor：Prof Pei Fu Xing ABSTRACT Objecfive：m order to find why estrogen treat osteoporotic patients，the effects of estrogen osteoblast apoptosis and expressing of apoptofic genes were studied． Methods：(1)Osteoblasts w盱e cultured from newly born SD rats calvaria, and confirmed by morphological observation and alkaline phosphatase(AKP)staining．(2)Osteoblasts of second third generation weTe divided randomly into five groups，naraely control group、Berum hungry、seruln hungry with es打ogen．1ipopolysaccharide and lipopolysaecharide with estrogen group，cells of each group were incubated for 24、48h、72h、5d、7d、14d，then Were taken out for examination，(3)cells of each group were labeled using the nucleic acid-bind dye acridine orange and were examined for morphological characteristics of apoptotic cell by fluorescence tight microscopy after incubated for 72h,morPhological characteristcs of apoptotic cells WerO also examined with TUNEL staining．(4)the rates of apop