发酵工程菌种的来源(2013).ppt

* 长江大学生科院生物工程系 * （四）筛选的方法 随机筛选 也称摇瓶筛选，具体做法是：将诱变处理后菌体分离到琼脂平板上，培养后随机挑选菌落，一个菌落移入一支斜面，然后一支斜面的菌体接入一个三角瓶，放置在摇床上振荡培养，根据所测定产物活性的高低，决定取舍。 该法缺点是盲目性大，在突变概率小的情况下，如果菌落挑取少了，很难筛选到理想的突变株。 先平板菌落预筛，再摇瓶振荡培养复筛 大量菌落先经过平板预筛，保留5%~10%的预筛菌株（约200株），再进行摇瓶培养，复证被筛菌株的重演性，同时从200株中筛选出更高产量的突变株。 * 长江大学生科院生物工程系 * 此法不仅减少了人力物力，缩短了周期，而且减少了盲目性，提高了筛选效率。 通过平板菌落预筛主要是淘汰那些低产菌株，有的是根据菌落形态来淘汰，如红霉素产生菌，若突变株是带色素的，往往是低产株应淘汰；有的是根据生化反应特征来淘汰，如抑菌圈、变色圈、透明圈或其他特异性反应圈。 筛选的关键是选择一定的特征（如菌落特征、生化特征等）去判断所筛选的菌株是我们所需要的突变株。 * 长江大学生科院生物工程系 * （五）几种诱变剂的使用方法 新鲜斜面菌种+生理盐水或缓冲液洗下→振荡→稀释菌悬液→取5ml菌悬液→无菌培养皿→磁力搅拌→15W、30cm紫外灯（营养体3~5min，芽孢10min）照射→黑纸包好增殖培养→挑单菌落 2、化学诱变（以亚硝酸为例） 亚硝酸易分解，故常在诱变前用亚硝酸钠在pH4.5的醋酸缓冲液中生成亚硝酸的方法现配现用。 1、紫外线诱变 * 长江大学生科院生物工程系 * 取孢子悬液2ml，加入1ml 0.1mol/L NaNO2溶液和1ml pH4.5醋酸缓冲液，27℃保温处理若干分钟（如10min）后，取出2ml加到10ml 0.07mol/L pH8.6的磷酸氢二钠缓冲液中，pH下降至6.8左右以后中止诱变。然后稀释涂平板，培养后挑单菌落进行选择。 处理真菌孢子： * 长江大学生科院生物工程系 * 处理细菌 将出发菌株接入5ml肉汤中，于370C振荡培养至对数生长期，离心收集菌体，加入数亳升无菌生理盐水，洗涤一次，离心后菌体悬浮在2.5ml0.1mol/L醋酸缓冲液中（pH4.5），然后加入2.5ml0.1mol/L亚硝酸钠，在370C处理数分钟（如5min）后稀释涂皿，培养后挑取单菌落，选择突变株。 * 长江大学生科院生物工程系 * 3、航天育种 所谓航天育种是利用空间环境高真空、微重力和强辐射的特点，在宇宙射线的辐射作用下，使生物的遗传性状发生变异，从而选育出优良品种。1996年以来，国防科工委相继组织了返地卫星和高空气球搭载微生物、动物细胞和植物种子，为微生物的诱变育种提供了新的手段。 * 长江大学生科院生物工程系 * 神舟七号飞船搭载微生物菌种包括灵芝、平菇、虫草、双孢蘑菇、杏鲍菇、茶树菇6种19管 中国南方航天育种技术研究中心和江西省农科院微生物研究所共同合作，采用航天育种诱变技术培育出的金针菇“航金１号”和“航金２号”，日前通过专家鉴定。具有抗杂性强、早熟、耐高温、品质好、产量高等特点 3、航天育种 * 长江大学生科院生物工程系 * 思考题 1、 自然界分离微生物的一般操作步骤？2、 从环境中分离目的微生物时，为何一定要进行富集富集？3、 什么叫自然选育？自然选育在工艺生产中的意义？4、诱变育种对出发菌株有哪些要求？ 5、诱变选育的流程？ 6、工业上优良生产菌种应具备哪些基本特性？ * * 长江大学生科院生物工程系 * * 长江大学生科院生物工程系 * A 分区划线法 B 连续划线法 返回 长江大学生科院生物工程系 * 将样品分散到最低浓度 倒平板，培养，挑取单菌落 后面3个稀释度各取0.1 ml涂布 返回 * 长江大学生科院生物工程系 * 返回 * 长江大学生科院生物工程系 * 例1：分离某种产生有机酸的菌株时，在培养基中添加碳酸钙。 例2：分离淀粉酶产生菌时，培养基以淀粉为唯一碳 源，待样品涂布到平板上，经过培养形成单个菌落 后，再用碘液浸涂，根据菌落周围是否出现透明的水 解圈来区别产酶菌株。 * 长江大学生科院生物工程系 * 例1：分离果胶酶产生菌，用含0.2%果胶为唯一碳源，菌落长成后加入0.2%的刚果红溶液染色4h，具有分解果胶能力的菌落周围便会出现降红色的变色圈。 例2：分离内肽酶产生菌，除了用酪蛋白作底物平板产生透明圈进行鉴别外，还可用吲羟乙酸酯为底物加到分离培养基内，产生蛋白