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检验方法 1.显微镜检查 2.分离培养 3.鉴定 克雷伯菌属 湖北三峡职业技术学院 张新明 克雷伯菌属 一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验 肺炎克雷伯菌 臭鼻克雷伯菌 鼻硬结克雷伯菌 产酸克雷伯菌 解鸟氨酸克雷伯菌 植生克雷伯菌 土壤克雷伯菌 最常见:肺炎克雷伯菌 一、克雷伯菌属分类 肺炎克雷伯菌革兰染色 较短粗的杆菌,大小0.5~0.8×1~2um,单独、成双或短链状排列。无芽胞,无鞭毛,有较厚的荚膜,多数有菌毛。 肺炎克雷伯菌电镜图 二、细菌特性 形态与染色 肺炎克雷伯菌荚膜染色 培养特性 兼性厌氧菌,营养要求不高。 血琼脂培养基:圆形、突起、灰白色、较大粘液菌落,接种环挑之易拉成丝,有助鉴别。 肠道选择性培养基:发酵乳糖产酸,呈现有色菌落。 克雷伯菌在血平板、普通平板上菌落 克雷伯菌在SS、中国兰平板上菌落 血琼脂平板 麦康凯(MAC) 肺炎克雷伯菌粘丝试验 生化反应 分解乳糖产酸 分解葡萄糖产酸产气 氧化酶阴性 IMViC - - + + 动力、硫化氢、鸟氨酸和精氨酸均为阴性 脲酶、赖氨酸试验、硝还试验均为阳性 肺炎克雷伯菌KIA(A A++ )、MIU(--+) 肺炎克雷伯菌IMViC试验(--++) 具有O抗原与K抗原,后者用以分型。 利用荚膜肿胀试验,本属K抗原可分为82型。 肺炎克氏菌大多属3型和12型; 臭鼻克氏菌主要属4型,少数为5型或6型; 鼻硬结克氏菌一般属3型,但并非所有3型均为该菌。 抗原构造 克雷伯菌属的细菌多感染免疫力低下的人群,是医院感染中最重要的条件致病菌。 所致疾病:肺炎、脑膜炎、腹膜炎、泌尿系统感染、败血症 三、临床意义 (一)检验程序(二)标本采集 (三)检验方法(四)耐药性 (五)结果分析与报告 四、微生物学检验 微生物检验 1、标本直接检验 2、分离培养与鉴定 标本的采集 肺部感染:采集痰液 肠炎采集粪便, 败血症者采集血液, 其他根据病症分别采集尿液、脓汁、脑脊液、胸水及腹水等。 标本直接检验 有些标本可直接涂片染色镜检,镜下出现带有荚膜的革兰阴性杆菌。 分离培养 MAC平板:粉红色粘稠菌落。 EMB:大、粘稠、红色、易融合成一片菌落 SS:红色或粉色,或中间粉色无色菌落 XLD:不透明黄色菌落 血平板:灰白色、大而粘、光亮形成粘丝菌落 初步鉴定 氧化酶(-) 葡萄糖(+) 动力(-) 吲哚(-):产酸克雷伯(+) 尿素酶(+) 基本生化 TSI:⊕/⊕, 枸(+) 尿素酶(+), 吲哚(-) V-P(+) 动力(-) 鸟氨酸(-) 丙二酸盐(+) 亚种鉴别 肺炎克雷伯菌三个亚种的鉴别关键是IMViC试验; 肺炎亚种的结果为--++; 臭鼻亚种为-+-d; 鼻硬节亚种为-+--; 臭鼻和鼻硬节克雷伯菌亚种也可用丙二酸盐利用加以区分,前者阴性,后者阳性。 表 克雷伯菌属种的鉴别 ? 试验? 产酸克 肺炎克 肺炎亚种 雷伯菌 雷伯菌 臭鼻亚种 鼻硬结亚种 ? ? ? ? 靛基质 + - - - ? 甲基红 - - + + ? 枸椽酸盐 + + -/+ - ? 赖氨酸 + + -/+ - ? 丙二酸盐 + + - + ? 最后鉴定 1、动力(-)鸟氨酸(-) 2、肺炎克雷伯吲哚(-),50C、100C(-) 410C(+) 3、产酸克雷伯:100C、410C(+)50C(-) 血清学鉴定 荚膜肿胀试验: 肺炎克雷伯菌荚膜肿胀试验 肠毒素试验 动物试验 肺炎克雷伯菌易产生超广谱β-内酰胺酶(ESBL),近年来文献报道我国产酶率已达30%左右,产酶株对青霉素类、第1、2、3代头孢菌素及单环β-内酰胺类抗生素均产生耐药,而仅对头霉素类、碳青霉烯类及酶抑制剂敏感。ESBL检测现已作为医院细菌室常规检测项目。 肺炎克雷伯菌检验程序
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