细菌的生理学实验.pptVIP

细菌的生理学 实验内容 基础培养基的制备 细菌的接种技术和培养方法 细菌代谢产物的测定 细菌生长情况的观察 目的要求 了解培养基的概念、基本成份、制备过程、种类及用途。 掌握细菌的纯种分离培养技术和不同种类培养基接种法。 了解常用细菌培养法及培养结果的观察与描述方法。 掌握细菌常见的生化反应的原理、操作方法及结果观察法。 一、基础培养基的制备（示教） 1.培养基的概念：培养基是用人工方法，将多种物质按照各类微生物生长繁殖所需要而配制的一种混合营养料。 2.培养基 的制备过程 以牛肉膏汤培养基为例（液体） 成分： 牛肉膏3克 蛋白胨10克 氯化钠5克 蒸馏水1000毫升 肉汤培养基 取1000毫升肉浸液，加入10克蛋白胨和5克氯化钠 经上述步骤制成。 其营养价值较牛肉膏汤要高。 但因肉浸液制作烦琐，而牛肉膏汤培养基制作简单，故常用。 肉汤琼脂固体、半固体培养基 琼脂：属于凝固剂，其化学成份主要是酸性多糖。其特点是当温度达到98℃以上可融化于水，45℃以下则凝固。 肉汤琼脂半固体培养基：取100毫升pH7.8的肉汤或牛肉膏汤培养基加入加入0.3～0.5％琼脂制成。 肉汤琼脂固体培养基：取100毫升pH7.8的肉汤或牛肉膏汤培养基加入2～3克的琼脂制成。 3.培养基的种类 按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体三类。 按照培养基的用途可分为五类。 按照培养基的组成成分分为三类。 4.培养基的用途 传染病病原的诊断和鉴定 细菌学研究 生物制品的制备 菌种的保存 制造各种产品 基因工程中的应用 二、细菌的分离培养技术 大多数细菌都可用人工的方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究各种生物学特性。培养细菌时，根据研究的目的和细菌生长的需要，要采用不同的接种技术和培养方法。 接种技术一般分为分离培养法和纯种细菌接种法 （一）分离培养法 细菌分离培养的目的是获得纯种（单个菌落）。 分离培养成纯种菌的方法有平板划线法、倾注平板法和动物接种分离法等，其中以划线法最为常用。 1．平行划线法： 标记 涂基线 划线 划线完毕，将琼脂平板培养基复盖皿盖，并在培养皿底玻璃上，用笔蜡注明接种菌名、接种者姓名及班级、日期等，将培养皿倒置放在孵育箱培养，以避免培养过程中凝结水自皿盖滴下。 平行划线法的示意图 见图2-2A B是最常使用的、最基本的方法，其中图B常用于含菌量较少的标本。 2．分区划线法： 基本步骤与平行划线法相同，不同之处是在每次划线前要烧灼接种环，以杀灭环上留剩的菌液。 如图2-3C、D和图2-4E所示，用于含菌量较多的标本。 本次试验要求同学首先掌握细菌分离培养的平行划线法。 图2-3 分区划线法示意图? 三段分区法 四段分区法  五段分区法 【实验结果观察记录】 细菌生长情况的观察 观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形 状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。 2、菌落的三个类型： 1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S型 2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型 3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M型 （二）细菌纯种接种法 1.斜面培养基接种法 2.液体培养基接种法 3.半固体培养基穿刺接种法 取菌的方法 斜面接种法及接种后菌落生长示意图 液体培养基接种法半/固体琼脂培养基种接法 液体培养时的群体形态： （三）细菌的培养方法 一般培养法 二氧化碳培养法 厌氧培养法 三、细菌常见的生化反应结果观察 （一）单糖发酵试验 【材料】 1．菌种：大肠杆菌、乙型副伤寒杆菌和痢疾杆菌斜面培养物。 2．培养基：葡萄糖、乳糖半固体发酵管。 【方法】 半固体穿刺接种法 【结果观察】 在半固体发酵管中，如细菌分解这种糖，则指示剂改变颜色，如还能产气，则培养基中有气泡形成。 产酸者用“+”表示， 产酸又产气用“⊕”表示， 不分解者用“－”表示。 （二）IMViC试验 【材料】 菌种：大肠杆菌、产气杆菌的18～24小时斜面培养物。 培养基： 蛋白胨水培养基。 葡萄糖、磷酸盐蛋白胨水培养基。 枸橼酸盐利用试验 1.吲哚（靛基质）试验 原理：测细菌有无色氨酸酶 方法：分别接种大肠杆菌，产气杆菌于2支蛋白胨水培养基中。37℃孵育48小时后取出，每管加2～3滴吲哚试剂于液面上，在接触面呈玫瑰红色（环状）者为阳性，仍呈黄色者为阴性。 2.甲基红试验 原理：测定细菌分解葡萄糖后，培养物中的最后酸碱度。 方法：分别接种大肠杆菌和