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关于乙型肝炎疫苗免疫原性的评价 李河民 梁争论 张华远 中国药品生物制品检定所 一．乙肝感染年龄与预后的关系 1岁以下新生儿儿童感染者80-90%为慢性感染状态； 1-4岁儿童感染者30-50%为慢性感染状态； 5岁以下儿童感染者＜10%有临床症状，＞90%无症状； 成人初次感染者30-50%有临床症状，但仅2-5%为慢性感染状态。 二．乙肝疫苗种类： 血源疫苗：从血浆提取HBsAg作为抗原，曾在研究和使用中为后来的基因工程疫苗打下了基础，现已淘汰。 基因工程疫苗：曾研究过用真核和原核细胞作为表达宿主，包括哺乳动物细胞、植物细胞、酵母、细菌和病毒等。目前大规模生产的表达系统有酿酒酵母、毕赤酵母和汉逊酵母等基因工程疫苗，其次为CHO细胞基因工程疫苗，还有HBsAg+PreS2或HBsAg+PreS1+ PreS2（CHO细胞和酵母表达系统）。 三．不同类型疫苗抗原免疫原性和一些生物学特征 HBsAg肽谱； HBsAg的表达方式； HBsAg在BALB/c小鼠体内免疫应答； 其他：二硫键和宿主组织成分。 1.HBsAg肽谱： HBsAg由100个单体组成的蛋白，SDS分析HBsAg肽谱，糖基化和非糖基化的多肽（表1）。 表1.不同种类乙肝疫苗抗原性质比较 2.HBsAg的表达方式： 血源HBsAg——人的组织细胞中病毒表达； 酿酒酵母和CHO细胞中质粒表达； 毕赤和汉逊酵母（甲基营养型），HBsAg基因整合于酵母染色体中表达。 3.HBsAg在BALB/c小鼠体内免疫应答 血源疫苗、CHO基因工程乙肝疫苗、酿酒酵母和汉逊酵母基因工程疫苗比较（表2、3和图1、2） 表.3 LPS诱导不同来源免疫小鼠脾细胞的HBsAg体外增殖试验结果比较 图1.不同来源的乙肝表面抗原免疫小鼠后不同时间脾细胞诱生IL-2比较 图2.不同来源的乙肝表面抗原免疫小鼠后不同时间脾细胞诱生IFN-r比较 4.其他： 二硫键和宿主组织成分。 四．免疫效果 免疫效果-1： 副反应：近期轻微、中度发热反应为1-6%，观察报告制度不健全。 效果观察的规范化条件： 1) 按规程检定合格； 2) 严格筛选接种对象：新生儿-孕妇HBeAg阳性，OD值＞3倍CutOff值，儿童（6-12岁小学生），成人（18-60岁）均健康而乙肝感染指标阴性。 3) 免前初筛和测定用试剂为国产EIA或RIA（HBsAg、抗-HBs和抗-HBc）,免后用Abbott试剂（HBsAg、抗-HBs）复核和测定。 4) 结果判断：最后二次相同结果为准。 免疫效果-2： 10多年对868名新生儿，2291名小学生和120名成人效果观察。 1）国产乙肝酵母疫苗5μg的母婴传播阻断率为80.56-92.59%与血源疫苗30μg相当，5年后10mIU/ml以上抗体阳性率下降至60%左右（见表4）; 表4：不同种类乙肝疫苗母婴传播阻断保护率比较 免疫效果-2： 10多年对868名新生儿，2291名小学生和120名成人效果观察。 2）酿酒酵母乙肝疫苗用于成人所诱导抗体阳转率和滴度均较低(见表5和表6); 表5.儿童与成人5μg/剂国产酵母疫苗免疫后抗体滴度(mIU/ml)比较 表6.儿童与成人5μg/剂国产酵母疫苗免疫后抗体阳转率(%)比较 免疫效果-2： 10多年对868名新生儿，2291名小学生和120名成人效果观察。 3）综合我们研究结果说明对不同年龄组的临床观察结合实验室ED50和细胞免疫测定方法和指标，可较明确地评价乙肝疫苗的免疫原性（见表7）。 表7.对不同来源乙肝疫苗抗原的评价方法 五．疫苗的应用 对新生儿普遍免疫已表明可降低HBsAg携带率85-90%，对一些地区HBsAg阳性率已降至1%以下。 在农村应用的建议： 对HBeAg阳性母亲的新生儿注射4针，即在12月时增加1针； 在农村最好也对孕妇检测乙肝感染标志； 酿酒酵母疫苗对成年人（30岁以上）的注射剂量改为10μg/ml； CHO疫苗（10μg）最好用于近期无感染机会的个体或应用于制备特异性丙种球蛋白； 参考WHO的建议使用联合疫苗。 Table8. Options for adding hepatitis B vaccine to childhood immunization schedules 六．问题： 对疫苗接种无应答的问题； 疫苗的铝佐剂问题； 对HBsAg变异株的免疫。 * * 1.0-2.5 0.2-0.3 0.2-0.3 57±2 39±3 42±6 P24 P24 GP27 P24 GP27 GP30 1:1.02 1:1.82 1:1.77 酵母-HBsAg 血源-HBsAg CHO-HBsAg ED50(μg) 表位密度(