人脐静脉内皮细胞体外分离培养方法改进的探索及鉴定.pdfVIP

人脐静脉内皮细胞体外分离培养方法改进的 探索及鉴定 AnImprovedM ethodofCulturingHumanUmbilical VeinEndothelialCellsanditsCharacterizati0n 林少芬 周焕娇 丁运 刚 梁小玲 罗 燕 唐仕波 中山大学眼科学国家重点实验室 中山大学中山眼科中心，广州 510060 ShaofenLin，HuanjiaoZhao，YungangDing，XiaolingLiang，YanLuo，ShiboTang StateKeyLaboratoryofOphthalmology，ZhongshanOphthalmicCenter，SunYat—senUniversity， Guangzhou510060，China 目的：建立能大量分离人脐静脉内皮细胞的体外培养的简便方法 ，分析人脐静脉内皮细胞抗 原表达的特点。 方法：采用玻璃接管连接医用三通管灌注0．133％胶原酶I法分离脐静脉内皮细胞 ，培养于 10％胎牛血清的人内皮细胞培养液 (含 B一促 内皮细胞生长因子和肝素钠)，培养皿用 1．5％明 胶包被 ，促进 内皮细胞贴壁。培养过程中观察细胞 的形态特征 ，同时行免疫组织化学染色检测 第八因子相关抗原、CD31表达情况，鉴定内皮细胞来源。 结果：成功获取人脐静脉内皮细胞 ，原代人脐内皮细胞 24h贴壁 ，第 5日细胞融合；第八因子 相关抗原和 CD31呈广泛 的阳性表达 ，第八因子相关抗原阳性染色程度高于 CD31，证实为人 脐静脉内皮细胞。 结论：应用玻璃接管连接医用三通管灌注胶原酶消化法分离脐静脉 内皮细胞 ，利用 10％优质 胎牛血清的人内皮细胞培养基 ，添加 B一促内皮细胞生长因子和肝素钠 ，并用 1．5％明胶包被 培养皿 。能简单有效培养人脐静脉内皮细胞。腠 学援 2010；2599—102． 关键词：人脐静脉内皮细胞 、细胞培养方法、鉴定 Purpose：T0establishasimpleandconvenientmethodforthecultureofhumanumbil． icalveinendothelialcells(HUVECs)andstudyitscharacterizationinvitro． M ethods：Humanumbilicalcord wasisolatedanddigestedbycollagenasetypeI．And then．itwasculturedin1．5％gehaincoateddishwith10％fetalbovineserum(FBS)， heparinsodiumandp—endothelialcellgrowthfactor(p-ECGF)inhumanendothelial basalgrowthmedium．HUVECswereidentifiedbyanti．humanfactorⅧ relatedantigen andCD31immunohistochemicalstaining． Results：WecansuccessfullycultureHUVECsinthisway．HUVECsattachedthedish in 24hoursandtheconfluencewasseenin5days． HUVECsweregenerallypositive foranti．humanfactorⅧ relatedantigenandCD31． Conclusion：ItiSafastandeffectivemethodtoculturepurifiedHUVECssuccessfully inwhichweusecollagenasetypeItodigestHUVECswithglasstubeconnectedtoT— tube．humanendothelialbasalgrowthmedium containing10％ FBSandhepafin sodi． amandB