GB/T 36789-2018动物狂犬病病毒核酸检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 £3© 中华人民共和国国家标准 GB/T 36789—2018 动物狂犬病病毒核酸检测方法 Nucleic acid detection of animal rabies virus 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 发布 GB/T 36789—2018 百 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业农村部提 。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本标准起草单位:军事医学科学院军事兽医研究所。 本标准主要起草人：冯烽、郭焕成、许运斌、江禹、涂长春。 I GB/T 36789—2018 引 言 本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及4.4与套式RT-PCR检测方法相关的专 利的使用。 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。 该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下， 就专利授权许可进行谈判 。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案 。相关信息可以通过以下 联系方式获得： 专利持有人姓名：江禹、涂长春 地址：吉林省长春市净月经济开发区柳莺西路666号军事医学科学院军事兽医研究所 请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专 利的责任。 n GB/T 36789—2018 动物狂犬病病毒核酸检测方法 1范围 本标准规定了检测动物狂犬病病毒核酸的套式RT-PCR和荧光定量RT-PCR方法。 本标准适用于临床疑似狂犬病病毒感染动物脑组织、脊髓、脑脊液、唾液腺、唾液以及狂犬病病毒细 胞培养物中病毒核酸的检测(参见附录A)。 2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 RT-PCR :反转录-聚合酶链式反应(Rcverse-Transcription Polymerase Chain Reaction) DNA :脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid) RNA：核糖核酸(Ribonucleic Acid) DEPC :焦炭酸乙二酯(Diethypyocarbonate) PBS：磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer Solution) Ct值：达到阈值的循环数(Cycle Threshold) EDTA :乙二胺四乙酸(Ethylene Diaminetetraacetic Acid) dNTP :三磷酸脱氧核糖核昔(Deoxy-Ribonucleoside Triphosphate) Tag 酶：耐热 DNA 聚合酶(Thermus Aquaticus Polymerase) 3器材和试剂 3.1器材 3.1.1仪器 II级生物安全柜、4 °C离心机、冰箱(一20 °C) 、冰柜(4 °C) 、分析天平、PCR扩增仪、荧光定量PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪(或紫外分析仪)、微波炉、震荡混匀器、组织研磨器、单道可调 移液器 (10 pL 、200 卩L 、1 000 mL)0 3.1.2 耗材