GB/T 36815-2018蓝莓果腐病菌检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 OB 中华人民共和国国家标准 GB/T 36815—2018 蓝莓果腐病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Diaporthe vaccinii Shear 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 发布 GB/T 36815—2018 — 1— 刖 目 本标准按 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：罗加凤、崔铁军、刘跃庭、张莹、黄国明、廖芳。 I GB/T 36815—2018 蓝莓果腐病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了蓝莓果腐病菌的分离培养、致病性测定及分子生物学检测方法。 本标准适用于蓝莓果腐病菌寄主种苗、植株和果实中蓝莓果腐病菌的检疫鉴定。 2蓝莓果腐病菌的基本信息 中文名：蓝莓果腐病菌 学名:Di a portlie vaccijiii Shear 无性学名:Phomopsis vaccinii Shear N.E. Stevens H.F. Bain 英文名:fruit rot of blueberry,Phomopsis canker of blueberry,upright dieback of cranberry 分类地位：蓝莓果腐病菌｛Diaporthe vaccinii Shear)属真菌界(Fungi) ，子囊菌门(Ascomycota), 子囊菌纲(Ascomycetes) ,间座壳目(Diaporthales),间座壳科(Diapouthaceae) ，间座壳属｛Diaporthe) 。 传播途径:病菌依靠带菌种苗和果实进行远距离传播。 蓝莓果腐病菌的其他信息参见附录A。 3方法原理 病原菌的为害症状、分离培养性状、形态特征、致病性测定(参见附录A 、附录E 、附录C)及ITS1/ ITS4核酸序列比对结果作为蓝莓果腐病菌的检疫鉴定依据。 4仪器用具和主要试剂 4.1仪器用具 4.1.1仪器 体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱 、电子天平、高压灭菌锅、常规冰箱(一20 °C), PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像仪、高速冷冻离心机、恒温水浴锅。 4.1.2用具 灭菌培养皿(直径90 mm-100 mm) 、三角瓶、银子、手术剪、手术刀、接种针、一次性注射器 (1 mL) 、棉纱、脱脂棉、酒精灯、塑料研杵、可调微量加样器。 4.2主要试剂 乙二胺四乙酸(EDTA) 、十二烷基磺酸钠(SDS)、Tris-HCl 、氯仿、异戊醇、三氯甲烷、乙醇、氯化钾、 氯化镁、蛋白酶K 、引物ITS1/ ITS4、 Tg聚合酶等分子生物学试剂，或用植物组织及真菌基因组提取 试剂盒提取DNA 。葡萄糖、琼脂、青霉素、链霉素、乳酸,2.0%次氯酸钠(NaClO)o 酸性马铃薯葡萄糖培养基(APDA,pH 5.0〜6.0)、APDA选择性培养基(制备方法参见附录D)。