GB/T 36861-2018饲料添加剂β-甘露聚糖酶活力的测定　分光光度法.pdf

ICS 65.120 B 46 OB 中华人民共和国国家标准 GB/T 36861—2018 饲料添加剂卜甘露聚糖酶活力的测定 分光光度法 Determination of activity of -mannanase as feed additive — Spectrophotometric method 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 发布 GB/T 36861—2018 本标准按照GB/T 1.1—2009给岀的规则起草。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC 76)提出并归口。 本标准起草单位:浙江大学饲料科学研究所、浙江明珠动物保健品有限公司。 本标准主要起草人:邹晓庭、吴琪、周樱、王小骊、祝春雷、刘国花、谢红云、王凤芹、蒋媛嬪、方洛云。 I GB/T 36861—2018 饲料添加剂卜甘露聚糖酶活力的测定 分光光度法 1范围 本标准规定了测定饲料添加剂卩-甘露聚糖酶活力的分光光度方法。 本标准适用于饲料添加剂卩-甘露聚糖酶及其复合酶 。本方法的定量限为10 U/g。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 卜甘露聚糖酶活力单位 -mannanase activity unit 在37 °C 、pH为5.5的条件下，每分钟从浓度为3 mg/mL的甘露聚糖溶液中释放1 “mol还原糖所 需要的酶量为一个卩-甘露聚糖酶活力单位（U 。 4原理 卩-甘露聚糖酶能将甘露聚糖降解成寡糖和单糖 。还原性寡糖和单糖在沸水浴中与DNS试剂发生 显色反应 。反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中卩-甘露 聚糖酶的活力成正比 。通过分光光度计比色测定反应液的吸光度，计算出伕甘露聚糖酶的活力。 5试剂或材料 除非另有说明，试剂均为分析纯。 5.1水：符合GB/T 6682中二级水的规定。 5.2氢氧化钠溶液 （200 g/L ：称取20.0 g氢氧化钠，加水溶解,定容至100 mLo 5.3乙酸溶液（0.1 mol/L :取冰乙酸0.60 m L,加水稀释，定容至100 mLo 5.4乙酸钠溶液（0.1 mol/L :称取1.36 g三水乙酸钠，加水溶解,定容至100 mLo 5.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液（0.1 mol/L,pH 5.5 ：称取23.14 g三水乙酸钠，加入1.70 mL冰乙酸，再加 水溶解，定容至2 000 mLo测定溶液的pH,如果pH偏离5.5 ,用乙酸溶液 （5.3 或乙酸钠溶液 （5.4 调 节至5.5。 5.6 3,5-二硝基水杨酸（DNS 试剂：称取3,5-二硝基水杨酸（化学纯）3.15 g,加水500 mL,45 °C水浴 中搅拌5 s 。然后缓慢加入100 mL氢氧化钠溶液 （5.2 ,不断搅拌，直到溶液清澈透明（在加入氢氧化钠 过程中，溶液温度不要超过48 °C ） 。再逐