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一、改进表达载体，提高表达水平和产量 二、利用代谢工程，改进培养工艺，降低生产成本 三、抑制细胞凋亡，延长培养周期 四、采用糖基化工程，提高产品质量 五、转基因动物的研究 六、组织工程的研究 第九节 动物细胞制药的前景与展望 * 一、改进表达载体，提高表达水平和产量 采用更强的启动子和增强子 更好的利用扩增系统，增加基因拷贝数（GS-, DHRF-） 寻找高表达位点 提供高转录活性的基因环境 靶向同源整合宿主细胞DNA的高转录位点 * 采用更强的启动子和增强子 增加基因拷贝数（GS-, DHRF-） 提供高转录活性的基因环境 靶向同源整合宿主细胞DNA的高转录位点 * 二、改造工程细胞株，改进培养工艺，降低生产成本 利用代谢工程，改造工程细胞株 代谢工程，即采用基因工程的手段，使工程细胞增加或减少某种酶，改造它的代谢能力和途径，使其降低对某些营养物质的需要，减少某些代谢产物的产生和危害，以及控制工程细胞的增殖速度和制造产品的能力，改进细胞生长和产能特性； 遗传工程改造，抑制细胞凋亡（bcl-2），延长培养周期； 改造突变体，如不依赖胆固醇的NS0、悬浮CHO； 细胞株筛选（cell line screening） 改进培养工艺，降低生产成本 优化培养工艺（优化物化环境、培养基设计及流加方案；使用CDM培养基） * * 三、采用糖基化工程，提高产品质量 蛋白质有两种糖基化方式：N-糖基化和O-糖基化。O-糖链对蛋白质特性影响不大，N-糖链的不同对产品可产生较大的影响。 糖基化工程：用基因工程的手段，人为的改变肽链结构、增加某些酶基因以及改进和控制某些培养条件等，以达到正确糖基化的目的。 * 四、转基因动物的研究——动物生物反应器 自1982年Palimiter提出用转基因动物来生产药用蛋白以来，发展迅速。 优点：产量高，成本低，质量与天然一样。 缺点：不成熟，对动物和人的健康的影响。 * 五、组织工程的研究 组织工程：通过对细胞的大量培养，并用细胞直接作为一种治疗手段用于临床，或用培养的细胞进一步加工构成一种组织，如人造皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管和人造骨等，并用于临床治疗。 * 思考题 体外培养细胞的分类及特点 动物细胞生理特点 试述细胞融合的方法 列举动物细胞制药中常用的细胞株。 生产用细胞库的建立及要求，列举相关法规及内容 动物细胞培养的环境条件 常用动物细胞培养基有哪些 大规模培养有哪些操作方式 动物细胞生物反应器须具备哪些基本要求？类型、特点是什么？ 动物细胞制药有哪些新进展？ * The Vacanti mouse was a laboratory mouse that had what looked like a human ear grown on its back. The ear was actually an ear-shaped cartilage structure grown by seeding cow cartilage cells into a biodegradable ear-shaped mold and then implanted under the skin of the mouse. The earmouse, as it became known, was created by Charles Vacanti and colleagues in the Department of Anesthesiology (University of Massachusetts Medical School) and their results were published in 1997. The mouse itself is called a nude mouse, a commonly used strain of immunocompromised mouse, preventing a transplant rejection. * * 当转染的目的基因连有dhfr基因时，阳性细胞也就获得了dhfr基因。MTX是二氢叶酸还原酶的抑制剂，可阻碍其作用。当细胞培养基内含有MTX时，二氢叶酸还原酶被抑制，通过反馈调节。使得该基因自我扩增，连带其上下又100-1000kb的基因都会扩增。如此目的基因也得到扩增，即可提高目的蛋白的表达量。 * ICH:International Conference on Harmonization of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use. * * 利用海藻酸和多聚赖氨酸制造微囊。 * （3）包埋和微囊培养 借鉴了酶固定化