O157检验方法的建立及实验室比对结果的报告.pptVIP

GB4789.36-2008食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验 廖兴广 liaoxg@ 河南省疾病预防控制中心 2009.3.14 一、背景 任务来源 2. 项目负责与协作单位 本标准负责起草单位是中国疾病预防控制中心营养与食品安全所 协作单位：河南CDC、浙江CDC、北京CDC、湖北CDC、吉林CDC、上海CIQ 3. 背景资料 认识 爆发与流行情况：国际、国内 二、标准制订遵循的原则 参照美国FDA、美国USDA、北欧食品分析委员会（NMKL）、AOAC的有关标准。 结合标准的比对与验证试验结果，吸取快速检测方法，力求科学实用、准确可靠，易于掌握和推广使用。 三、国际现状 食品中O157:H7大肠杆菌检验的传统方法，FDA/BAM、USDA/BAM、NMKL、CCFRA、AOAC/BAM等均制定了相关及检测方法标准，FDA/BAM、AOAC/BAM 、CCFRA方法中将免疫磁珠分离技术作为选用方法，USDA/BAM、 NMKL将免疫磁珠分离技术作为指定方法。 富集培养基：FDA/BAM使用EHEC Enrichment Broth (EEB)+CCV，USDA/BAM使用mEC+n，NMKL使用 mTSB+Nov20mg/l，CCFRA使用BPW-VCC或mEC+n，AOAC/BAM使用mTSB+Nov。 分离培养基：FDA/BAM为CT-SMAC、USDA/BAM为Rainbow agar、NMKL为CT-SMAC、CCFRA为SMAC 和CT-SMAC、AOAC/BAM为Rainbow agar。分析样品量USDA/BAM为65g，其余为25g。 培养温度：NMKL为41.5±0.5℃，USDA/BAM为35±2℃，其余为37℃。 质量控制与安全性控制：USDA/BAM 四、主要修订内容 本标准第一法修改采用美国FDA Bacteriological Analytical Manual Online Chapter 4A September 2002 。第二法修改采用欧洲NMKL Nordic Committee On Food Analysis No 164 1999。第三法修改采用AOAC-RI Performance Tested Methods VIDAS E.Coli O157（ECO）Test，2005.18。第四法等同采用AOAC-RI Performance Tested Methods BAX ? E.Coli O157:H7 ,2004.3。 本标准第一法与美国FDA/BM 方法的主要差异如下： —文本的格式、文字描述。 —增菌培养基以mEC+nov肉汤替代了EEB＋CCV肉汤。 —增加了CHROMagarTMO157显色培养基。 —增加了质量控制与生物安全方面的内容描述。 本标准第二法与NMKL Nordic Committee On Food Analysis No 164 1999的 —文本的格式、文字描述。 —增菌培养基以mEC+nov肉汤替代了mTSB肉汤。 —修改增菌培养温度41.5℃±0.5℃为36℃±1℃。 —增加了CHROMagarTMO157显色培养基。 本标准第三法与AOAC-RI Performance Tested Method VIDAS E.Coli O157（ECO）Test的主要差异如下： —文本的格式、文字描述。 —前增菌培养基以mEC+nov肉汤替代了mTSB肉汤。 肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验 标准操作程序 一、 常规方法 检样 ↓ 25g(mL)+改良EC肉汤(mEC+n）225ml 快速筛选 阴性 36±1℃ 18～24h