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PKH26 红色荧光细胞连接试剂盒（普通细胞膜标记） 产品编号：MINI26，MIDE26和PKH26GL 室温保存 TECHNICAL BULLETIN 产品说明 PKH26荧光细胞连接试剂盒采用拥有专利的膜标记技术，能够将带有较长脂质尾巴的黄色-橙色荧光染料（PKH26）结合到细胞膜脂质区域上。试剂盒中提供染色过程中所需的溶剂（稀释液C），该溶剂可以可以在染色过程中，增加染料溶解度和染色效率，同时维持细胞活力。稀释液C与哺乳动物细胞等渗，且不含去垢剂或有机溶剂，也不含生理盐水和缓冲盐。根据细胞类型及标记后细胞膜内在的变化，标记后的细胞表面会由均一透亮变得有点状凸起或补丁状。但在生理范围内，PKH26荧光不受pH的影响，每个细胞的荧光强度与染料标记位置无关。 PKH26荧光在黄色-橙色区域（图一），可用来标记追踪体内外多种细胞。在细胞毒性分析，荧光蛋白、抗体或DNA染料在该区域发出的紫色、绿色、红色和远红外等，不会与PKH26产生干扰。PKH26最常被用于基于染料稀释增殖的分析的染料稀释应用，包括建立抗原特异性前体frequecies和正常或肿瘤组织中静止或缓慢干细胞或祖细胞的鉴定。同时PKH26也可用于监测外来病毒、血小板和其他纳米颗粒的摄入；干细胞分裂过程中膜的分配；细胞-细胞之间膜的转移；细胞吞噬作用；抗原呈递；粘附；通过间隙连接的信号传递；以及组织切片中的神经元迁移。由于其荧光稳定性较强，PKH26被用于体内细胞追踪研究，特别是在标记的细胞的研究周期超过一周时。 图1. PKH26激发和发射光谱 试剂组成 PKH26染料*（P9691） 稀释液C（G8278） MINI26 1×0.1mL 1×10mL MIDI26 2×0.1mL 6×10mL PKH26GL 1×0.5mL 6×10mL *1×10-3M （溶于乙醇） MINI26试剂盒推荐用于小的或初步试验研究，PKH26GL用于体内实验研究 所需设备和试剂（试剂盒未提供） ·充分分散的单个悬浮细胞 ·含血清的组织培养基（完全培养基） ·无Ca2+，Mg2+和血清的培养基或者缓冲盐（如Dulbecco’s PBS或Hank’s BSS） ·血清，白蛋白或其它组织兼容性蛋白 ·离心管（4-15mL） ·温控离心机（1,000×g） ·荧光分析设备（荧光读板机，荧光或共聚焦显微镜，流式细胞仪） ·层流罩 ·血球计数板或细胞计数器 ·载玻片和盖玻片 注意事项和免责说明 该产品仅用于科研，不用于制药、家庭或其它用途。请遵照安全数据清单中关于有害及安全操作规范操作。 储存/稳定性 PKH26乙醇溶液（货号 P9691）可室温或冷藏保存。减少蒸发以防止染料浓度升高。保证染料乙醇溶液瓶盖盖紧。该染料避光保存，使用前观察是否有结晶。如出现结晶，37℃热水浴加热，然后超声或震荡直至溶解。 稀释液C可室温或冷藏保存。如果冷藏保存，使用前复温至室温（过程，步骤A5和A6）。稀释液C为无菌溶液，不含任何防腐剂和抗生素，其需保持无菌。不要将染料储存于稀释液C中。溶于稀释液C的工作液需现配现用，且配好后需立即使用。 操作过程 A. 一般细胞膜标记 亲脂性染料结合到细胞膜上完成标记。染色强度是染料浓度和细胞浓度的函数，与渗透性无关。因此，保证染料添加量不过量非常关键。过标记的细胞将会导致细胞膜完整性缺失和reduced cell recovery。 下列过程可用于体内体外细胞的标记，包括干细胞、淋巴细胞、单核细胞、内皮细胞、神经细胞或者任何其他细胞。体内细胞的标记过程需一定的改进，如血小板的染色，或者选择性标记吞噬细胞。 General cell membrane labeling should be performed prior to monoclonal antibody staining. The membrane dyes will remain stable during the monoclonal staining at 4℃；however, capping of the monoclonal antibodies is highly probable if the general cell membrane labeling is carried out at ambient temperature subsequent to antibody labeling. 下述染色过程中细胞浓度和染料浓度代表操作的起始浓度。该浓度被证明适用于多种细胞。使用者需通过评估染色后细胞活率（如，PI染色）、荧光强度、染色均匀度及是否对所研究细胞功能有影响等，根据实验目的，确定最优的染料浓度和细胞浓度。 注意1：PKH26染色过程中，不能存在叠氮化物或代谢毒性物。 注意2：虽然贴壁细胞也