第五部分肿瘤遗传学二.pptVIP

第三节 二、癌基因 1、癌基因 病毒癌基因 细胞癌基因-原癌基因 看家基因：进化高度保守，重要功能 第三节 2、癌基因的功能与分类 功能：生长、增殖：生长因子有关； DNA结合蛋白。 分类：酪氨酸蛋白激酶类：Src G蛋白类：Ras 核蛋白类：myc 生长因子类：sis 生长因子受体类：erb 癌基因异常激活-细胞恶性转化 第三节 3、癌基因的激活 （1）突变激活-质变模式 产生异常产物 摆脱正常调控 （2）易位激活 癌基因重排或融合：Ph染色体； 9；22易位， bar-abl融合基因 第三节 三、肿瘤抑制基因 1、功能：抑制生长；促进分化。 纯合失活导致细胞正常抑制丢 失，恶性转化 例如：Rb基因，临床AD；基因水平AR 2、杂和性丢失检测 3、AD抑癌基因 肿瘤抑制基因也称抑癌基因或隐性癌基因（recessive oncogene）。肿瘤抑制基因的概念最初是60年代在肿瘤细胞与正常细胞杂交研究的基础上提出的。正常细胞与肿瘤细胞融合形成的杂交细胞不具备肿瘤细胞表型，此外，正常细胞的染色体可以逆转肿瘤细胞表型。因此，人们提出了正常细胞中可能存在抑制肿瘤发生的基因，称为肿瘤抑制基因（tumor suppressor gene，TSG）。 TSG研究的途径（发现TSG的方法和证据） 细胞融合实验 克隆第一个TSG=RB1 杂合性丢失(Loss of heterozygo-sity, LOH 罕见家族性癌综合征研究 一、细胞融合实验 Harris （1971） 应用mini（micro）cell技术 将含有一条正常Chr的微细胞与肿瘤细胞融合，可抑制肿瘤，这为寻找TSG提供线索。 二、克隆第一个TSG –RB1 1976年 对多个RB 患者Chr缺失鉴定，最后确定SRO-13q14 细胞遗传学证据： 1983年Cavanee用13q12-q14片段为探针， 与p7F12、MSP1 片段杂交,确证存在4.3kb片段杂合性丢失时基因也缺失，证明RB在p7F12旁 分子遗传学证据： 最小重叠区 RB1基因 1986年 Friend 首先分离一cDNA 克隆可与 RB mRNA杂交 Lee WH又克隆了三个重叠的cDNA克 隆，进行 RB基因测序。 1988年 Su Huang HJ用反转录酶为载体将 RB导入RB细胞系 基因表达并抑制肿瘤特征，证实RB1 是一 个TSG。 RB1 200kb长，27exons mRNA 4.7kb，编码105kd蛋白，有928个氨基酸,是一与DNA结合的磷酸化蛋白质，具有-GGAAGTA元件，受p53调节。 三、杂合性丢失（Loss of heterozygosity-LOH） 从肿瘤细胞的某个染色体区域丢失一个等位基因，而对于该个体正常细胞来说这一区域是杂合性的，肿瘤细胞的这种现象称杂合性丢失。可以用能区分两等位基因的多态标记来检测杂合性丢失。DNA多态标记的杂合性丢失可有助于确定与其紧密连锁的抑癌基因的存在并精确定位. 检测LOH 可鉴定TSG的可能位置 基因 第一次突变——点突变或小缺失 （遗传性） 第二次突变——Chr的部分或全部缺失 机制：1）可因Chr不分离使整个染色体丢失。 2）可因有丝分裂重组，使染色体远端交叉，部分缺失。 3）可因新的中间缺失。 以上情况都可使其附近TSG的一个等位基因丢失。因此，对患者说，是杂合性丢失（一个标记），而肿瘤细胞丢失杂合性而为纯合性。 依此方法鉴定了17p的p53 、5q21的APC等TSG。 四、罕见家族性癌综合征研究 家族性癌（familial carcinoma) 一个家族中多个成员患同一类型的肿瘤。 RB是一例。 再如Li-Fraumeric Syndrome（LFS）鉴定了17p13-p53基因。 Malkin（1990）在5个该家系中发现患者体细胞中p53 突变和LOH；分子水平分析：均有相同的248处T-C碱基替换，并证实均有二次突变（第一次生殖细胞突变，第二次体细胞突变）。 这是