皮肤黏膜感染真菌的微生物学检验.docVIP

皮肤黏膜感染真菌的微生物学检验 (一)检验程序 皮肤黏膜感染 \o 杀真菌素链霉菌 真菌检验程序见图23-4。 (二)标本采集 采集皮屑前先用70％ \o 乙醇嗜热厌氧菌 乙醇消毒，取新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲近尖端下面或背面外表用刀刮去再采集甲屑：头发标本用消毒镊子拔取无光泽病发，有些断发要用无菌刀尖掘出，如吴氏光(一种波长约365nm紫外线的光源)阳性者(其病发和头皮出现荧光)，仅拔发荧光的头发，黄癣采集黄癣痂。将采集标本盛于清洁纸袋，鳞屑要用黑纸包好。 (三)显微镜检查 皮屑标本用10％KOH液制成湿片，指甲用25％KOH或25％oNaOH含5％甘油处理，也可加入5％Parker墨水或氯唑黑E以增加阳性率。镜检可见透明、有隔，常有分枝的 \o 白色链霉菌丝裂变种 菌丝及成链的关节孢子，三个癣菌属难以鉴别。在病发中可见发外型孢子、发内型孢子(图23—5)，不同皮肤癣 \o 金黄色葡萄球菌 菌属感染后有所不同，如毛癣菌属有发外型孢子和发内型孢子，而小 \o 糠秕马拉色菌(糠秕孢子菌) 孢子菌属感染病发只有发外型孢子。 (四)分离培养与鉴定 皮屑、甲屑和病发标本，先用70％乙醇或在青、链霉素混合液内处理5分钟，再用生理盐水洗3次，然后接种沙保弱琼脂斜面或平板( \o DMEM+10%FBS 500ml 培养基中加入0．05％氯霉素，加或不加0．05％ \o 游动放线菌属 放线菌酮)，25℃培养，每周观察 \o 气生菌落糖丝菌 菌落形态及颜色，直至第四周。挑取菌落镜检菌丝和孢子，也可作棉蓝染色后镜检或作小培养后镜检。必要时做其他鉴定如毛发穿孔试验、脲 \o CHO/dhFr- 酶试验和特殊营养需要试验等来鉴定皮肤癣菌（包23-1）。毛发穿孔试验是将人若干头发剪成1cm长，置于已加入25ml蒸馏水和2～3滴10％ \o 白假丝酵母 酵母浸膏液的平皿内，高压灭菌。将待检皮肤 \o 假真菌样芽孢杆菌 真菌接种于平皿内，置25℃培养四周，每周检查一次，每次取数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后，置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者为阳性，否则为阴性。每次同时用已知石膏样毛癣菌和红色癣菌作阳性和阴性对照，如须癣 \o 疣状毛癣菌 毛癣菌为毛发穿孔试验阳性。