水产动物微生物学第7章.pptVIP

* * 第七章 微生物的生长 第一节 微生物纯培养的生长 第二节 外界因素对微生物的影响 生长:细胞原生质量不断增加，体积得以增大。 繁殖:个体数目增加 在单细胞微生物中，细菌分裂的结果，是为繁殖；在多细胞微生物中，细胞数目的增加如不伴随个体数目的增加时，只能算是生长。条件适合的情况下，生长和繁殖始终是交替进行的。 微生物生长的概念： 1、稀释法幻灯片 4 2、划线法幻灯片 5 3、单细胞挑取法 4、利用选择培养基分离法幻灯片 7 第一节 微生物纯培养的生长 一、纯培养分离法 微生物学中将从一个细胞得到的后代称为纯培养。 第一节 幻灯片 12 划线法（一） 划线法（一） 划线法（二） 第一节 选择培养基应用技术 沙门氏菌选择性显色培养基 适合嗜水气单胞菌 生长的RS培养基 适合弧菌生长的TCBS培养基 微生物生长的测定是依据群体的增长量。方法有： （一）、直接计数法 设备简单，可迅速得到结果，还可观察细菌的形态特征。但不能区分死菌和活菌结果为总菌数。 1、涂片染色法幻灯片 9 2、计数器测定法幻灯片 10 3、比例计数法幻灯片 11 (二)、间接记数法 基于细菌在培养基中有生长繁殖的能力，因而测定的是活菌数，数值比直接记数法测定的要小。幻灯片 4 二、生长测定 a b d 细菌总数(个/ml)＝S长方形÷S圆形×细菌平均数×100二、生长测定 0.01ml 计算细菌总数的快速测试纸 计算大肠杆菌群总数的快速测试纸二、生长测定 10ml血液＋10ml菌液 混匀 0.01ml涂抹，计数。 血液:菌液＝1 : 3 细菌总数(个/ml)＝血球数(个/ml) ×3 ×100二、生长测定 1、平皿菌落记数法幻灯片 4 误差： ①并非所有生活细菌都可在实验条件下及实验期间生长、形成菌落。 ②细菌聚集成团，菌落则由几个或更多细菌形成。 ③有些细菌在操作时遭到破坏。 2、薄膜过滤计数法 (三)、测定细胞或原生质总量计数法 1、比浊法测定细菌悬液浓度 浊度计、光电比色计等都可用来细菌悬液浓度。 2、细菌总含氮量法确定细菌浓度 3、细胞干重法 4、生理指标法 比浊法 光电比色计 如果以细胞增长数的对数值或增长速度为纵坐标，以培养时间为横坐标作图，可得到一繁殖曲线。对单细胞细菌而言，它们的繁殖就是群体生长，所以又称为生长曲线。 三、生长曲线 细菌的生长曲线 生长曲线可分为几个阶段： 1、延迟期 特点：细胞体积增加快，细胞代谢活力强，细胞中RNA含量高，嗜碱性强，对不良环境条件敏感。 原因：适应新的环境而出现的调整代谢的时期。 延迟期的长短：与菌种遗传、菌龄及移种至新鲜培养基前后所处的环境是否相同等因素关。 2、对数生长期 在此期中，细胞数按几何级数增加1→2→2n，n为分裂次数或增殖代数，其间隔时间称为代时(G)，即每增加一代所需要的时间，可用下式表示： G＝t2－t1／n ＝ t2－t1／ 3.3（lgx2－lgx1） 利用此公式可计算出群体生长世代。 例：t0时每毫升菌液中细胞数为104，4h后细胞数增加到108，此条件的代时为： G＝ t2－t1 ／3.3( lgx2－lgx1 ) ＝4 ／ 3.3（8 － 4） ＝4 ／ 3.3×4 ＝0.3（h） n＝（t2－t1 ）/ G ＝4/0.3 ＝13.2(代) 特点： 生长速度高，群体中的细胞化学组成即形态、生理特征比较一致。 3、稳定期 新增殖的细胞数与死亡细胞数趋于平衡，活菌数保持相对稳定。 特点：开始积累储存物质，形成芽胞。此期可开始收获。 原因：有害代谢产物积累以及其他环境条件如pH、氧化还原电位等的变化对细菌生长不利。 长短：稳定期时间长短取决于菌种及环境条件。 4、衰亡期 细菌死亡率逐渐增加，以至细胞死亡数超过新生数，活菌数明显下降。 特点：细胞常出现多形态，包括畸形和衰退型，细胞死亡伴随着自溶。 将微生物置于一恒定容积的培养基中培养，最后一次收获，称为分批培养。人们设想：只要培养液的流动量