课件：植物组织培养植物组织培养技术愈伤组织的分化与再分化脱分化及形态发生分析.pptVIP

（二）培养基 1．生长调节剂： 细胞分裂素/生长素的比例是控制芽和根形成的重要条件之一。 激素控制理论：细胞分裂素/生长素比例高时有利于芽形成；而这一比例低时，有利于根的形成。这样通过变换激素的种类和浓度，即可有效地调节培养组织的器官分化。 不同激素的效果是不同的:如NAA对生根的作用比IAA和IBA的效果好，但用IAA和IBA处理，产生的根比较健壮，而用NAA处理，产生的根则较纤细。2，4-D往往利于愈伤组织的诱导。 愈伤分化 （二）培养基 2．无机营养元素 在植物组织培养，细胞的生长也要求满足植物生长的必要元素。 -----其影响不如激素的影响明显。 -----各种类型的植物所需要的每种元素的量，特别是大量元素是有区别的，如生根培养要求无机离子浓度小一些，所以常用1/2MS或White。 愈伤组织所表现出来的缺素症状如下： 氮——某些组织（如五叶地锦）表现出一种很引入注目的花色素苷的颜色；不能形成导管。 氮、钾和磷——细胞过度生长，形成层组织减退； 硫——非常明显地褪绿。 铁——细胞分裂停止。 硼——细胞分裂停滞，细胞伸长。 锰或钼——影响细胞伸长。 （二）培养基 3．有机成分 糖、B族维生素、肌醇和甘氯酸等—满足愈伤组织的生长和分化的要求。 氯基酸和嘌 呤、嘧啶类物质—促进器官分化。如：水解酪蛋白中含有多种氨基酸，在进行器官分化培养时，加入一定量是有益的。 （二）培养基 4 物理性质：固体或液体状态、渗透压等。 ——对形态发生有明显的影响。 培养基状态： 第一阶段诱导形成愈伤组织——固体培养基 第二阶段细胞和胚状体的增殖——液体培养基 第三阶段胚状体发育成可移植植株——固体培养基 培养基渗透压： 对细胞增殖和胚状体的形成都有十分明显的影响。如油菜花药培养宜先在高糖（9-10%）培养基中培养，有利于细胞增殖和胚状体的形成。 （三）培养环境条件 1.光周期的影响 ：根据植物种类、培养目的来决定 在愈伤组织诱导阶段：一般采用三种做法：全暗、周期性光照、散射性光照。 对一些植物三种培养方法结果差异较大。如：石刁柏全暗——诱导愈伤组织，要比周期性光照下好得多；大豆散射性光照——愈伤组织诱导比较好。 器官发生阶段：一般给予周期性光照比较好。 光周期长短因植物种类而异，多数植物8-10小时黑暗为宜。也有例外，有些植物如石刁柏需要16小时光照，12小时黑暗。 （三）培养环境条件 2、温度 一般为22-25℃的恒温进行培养。 喜温性植物： 26-28℃ 茄科、葫芦科、兰科、禾本科等。 冷凉性植物： 25℃以下 百合科、十字花科、菊科等。 培养周期中的昼夜温差影响：国内有关小麦、水稻花药培养温度试验的报道认为： 诱导花形成愈伤组织——昼夜恒温较好； 器官分化——昼夜具有一定温差比较好，分化出的小植株比较健壮。 菊芋试验也有类似的报道。 复习思考题 概念：愈伤组织培养 细胞全能性 胚壮体 愈伤组织培养对外植体有何要求? 愈伤组织的形态发生有哪两种方式？如何进行调控？ 4．用激素控制理论解释愈伤组织的形态发生方式。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 可编辑 可编辑 第三章 植物组织培养技术（愈伤组织的分化与再分化、脱分化，及形态发生） ?目的与要求： 1、了解愈伤组织形成的条件 2、掌握愈伤组织形成过程 3、掌握 愈伤组织的形态发生方式 4、了解愈伤组织形态发生的调控 植物组织培养类型 （按外植体）： 1. 器官培养 2. 茎尖分生组织培养 3. 愈伤组织培养 4. 细胞培养 5. 原生质体培养 胚状体：指由体细胞诱导分化出的胚芽、胚根、 胚轴的胚状结构。 外植体培养发育方向： 腋芽萌发（定芽） 脱分化后产生胚状体（原球茎） 脱分化后直接产生不定器官 建立悬浮系或分化胚状体及不定芽 ☆ 脱分化后形成愈伤组织 间接离体繁殖 直接 离体 繁殖 总结：From callus to plant 愈伤组织培养： 将外植体（explaut）在无菌条件下接种到培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。 原理： 细胞全能性（cell totipetency）：植物细胞具有全套遗传信息，在特定环境条件下能进行表达，而产生一个独立完整的植株个体。 脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态的过程。恢复细胞的分裂活性。 再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下转变为各种不同细胞类型的过程。 一． 愈伤组织形成的条件 1、脱离母体植株：摆脱了原来所受到的遗传上的控制和生理上的制约； 2、一定的培养条件：主要为激素的种类和浓度最为重要；