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细菌革兰氏染色实验报告 　　实验八、细菌革兰氏染色实验　　一、实验目的和内容　　目的：1.熟悉油镜的使用与保养。　　2.掌握细菌革兰氏染色法的原理及实验操作。　　3.了解革兰氏染色实验在细菌分类鉴定上的重要性。　　内容：1.学习显微镜的使用和保养。　　2.学习细菌革兰氏染色实验。　　3.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片并判断其结果。　　二、实验原理　　革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C．Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。染色前必须先固定细菌，其目的有二：一是杀死细菌，使细胞质凝固，菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时应尽量维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。　　三、实验材料和用具　　菌种：培养12-16h的苏云金杆菌或者枯草杆菌，培养24小时的青枯假单胞杆菌。　　染色液和试剂：吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液、结晶紫、鲁哥尔碘液、95%酒精、复染剂、二甲苯、香柏油。　　器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、打火机、记号笔、擦镜纸、显微镜。　　四、实验步骤：　　①涂片：取干净载玻片一块，在载玻片的加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，做成菌液。干燥制成薄的涂面，注意取菌不要太多，过火速度要快。　　②初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1min，倾去染液，流水冲洗至无色。③媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1min，后水洗。　　④脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20sec，后立即用流水冲洗。⑤复染：(来自:写论文网:细菌革兰氏染色实验报告)滴加复染剂——番红染色液，染3－5min，水洗后用吸水纸吸干。　　⑥镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察染色结果并绘图。　　五、实验小结　　简述革兰氏染色实验的一般步骤。　　哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？　　革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色？　　将实验结果填入下表并绘所观察到的细菌简图　　实验结果：　　★注意事项1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定，需要多加练习；　　2、选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。　　革兰氏染色法的原理及其练习　　摘要：革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，所以学习微生物学，进行革兰氏染色实验是很重要的。为保证染色结果的正确性，采用规范的的染色操作方法是十分必要。本实验主要对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌进行革兰氏染色，观察它们的染色特征，辨别是革兰氏阴性还是阳性，从而掌握其染色方法。染色方法与过程很清晰，但实验结果中金黄色葡萄球菌(Rosenbach）多组呈现假阴性。本实验的主要目的是熟悉并掌握革兰氏染色方法及原理，但要想做出很好的染色得多加练习。本实验还可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。关键词：革兰氏染色大肠杆菌()金黄色葡萄球菌(S.aureusRosenbach)枯草杆菌()　　引言　　革兰氏染色是微生物学中最重要的鉴别染色方法，它可以直接将细菌分为革兰氏阴性和革兰氏阳性。革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构组成与结构的差异所决定的。经过一定的染色过程后，革兰氏阳性的细菌会因为细胞壁肽聚糖的含量高，脂质含量低而保持第一次染色的蓝紫色。革兰氏阴性细菌细胞壁的脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，蓝色被洗脱，复染后变为红色。革兰氏染色原理很简单，染色时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌，涂片不宜过厚，严格控制脱色时间。　　大肠杆菌()是革兰氏阴性细菌，金黄色葡萄球菌(S.aureusRosenbach)与枯草杆菌()都是革兰氏阳性细菌，染色后在显微镜下容易区别。同时它们的形态各异，可以根据具体颜色和形态差异来判断染色是否成功。　　本实验还涉及到高倍油镜的使用。使用油镜与用一般的镜头不同，具体使用在实验方法中描述。　　材料　　菌种　　大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，枯草杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。　　溶液与试剂　　无菌生理盐水，草酸铵结晶