无菌检查法201012PPT.pptVIP

供试品的无菌检查 供试品的处理及接种培养基 1、薄膜过滤法 1.1、水溶液供试品 取规定量，直接过滤或者配成溶液后过滤。如供试品具有抑菌作用或含防腐剂，须用冲洗液冲洗滤膜，所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验。冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将100ml 硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内。如采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其分成3 等份，分别置于含50ml 硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中，其中一份做阳性对照用。 1.2、可溶于水的固体制剂供试品 取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签说明复溶，照1.1方法操作。 供试品的无菌检查 1.3、非水溶性制剂供试品 取规定量，直接过滤；或混合溶于含聚山梨酯80 或其他适宜乳化剂的稀释液中，混匀，过滤。用含0.1～1%聚山梨酯80 的冲洗液冲洗滤膜至少3 次。滤膜于含或不含聚山梨酯80 的培养基中培养。接种培养基的方法照1.1操作。 1.4、可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试品 取规定量，混合至适量的无菌十四烷酸异丙酯中，溶解，过滤。对仍然无法过滤的供试品，于含有无菌十四烷酸异丙酯中的供试液中加入不少于100ml 的稀释液，振摇萃取，静置，取下层水相作为供试液过滤。过滤后滤膜冲洗及接种培养基照非水溶性制剂供试品项下的方法操作。 供试品的无菌检查 2、直接接种法 取规定量供试品分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中。 2.1、固体制剂供试品 取规定量直接接种至各管培养基中。或加入适宜的溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取规定量接种至各管培养基中。 2.2、非水溶性制剂供试品 取规定量，混合，加入适量的聚山梨酯80 或其它适宜的乳化剂及稀释剂使其乳化，接种至各管培养基中。或直接接种至含聚山梨酯80 或其它适宜乳化剂的各管培养基中。 无菌检查法 2010.12 提纲 定义 定义 系指用于检查药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。 符合规定的意义： 仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 检查环境要求 常见检验品种 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基 30～35℃ 红色氧化层（h＜深度的1/5） 100℃水浴加热除去氧化层， 时间不超过20分钟 灭菌后放置3天 沸水浴，10分钟后 改良马丁培养基 23～28℃ 无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支（瓶）,培养14天,应无菌生长。 灵敏度检查 硫乙醇酸盐流体培养基 12ml，9支，4种菌，30～ 35 ℃培养3天。 改良马丁培养基 9ml，5支，2种菌（白色念珠菌、黑曲霉）， 23～ 25 ℃培养5天。 结果判断：空白管应无菌生长,加菌管均生长良好。 菌液制备（＜100 cfu/ml 的菌悬液） 硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查试验 生孢梭菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 金黄色葡萄球菌 稀释液以及冲洗液 0.1%蛋白胨水溶液 稀释液 如果蛋白胨溶液浑浊，应过滤 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 稀释液 聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液 非水溶液制剂供试品的冲洗 十四烷酸异丙酯 膏剂和粘性油剂的溶剂 膜滤除菌 方法学验证试验 何时须进行方法学验证 当供试品为新的产品时 当供试品的组分、检验条件发生改变时 验证用菌株：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉 菌种要求：不得超过5代 加菌量：＜100cfu 取样量：只需确定总检验量即可 检查方法的选择 薄膜过滤法 ：适用于有抗菌作用或大容量的供试品，首选 直接接种法 ：适用于非抗菌作用的供试品 薄膜过滤法 取规定量供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3～5天。各试验菌同法操作。 方法学验证试验 直接接种法 取硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别两两接入小于10