三维培养条件下流体剪切力对人真皮成纤维细胞成.pdf

１４１６ 　　　　　　　　　　　　　　第三军医大学学报，２０１６，３８（１２）　　 　　　　　　ｈｔｔｐ：／／ａａｍｍｔ．ｔｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　 ＤＯＩ：１０．１６０１６／ｊ．１０００５４０４．２０１５１２０１０ 三维培养条件下流体剪切力对人真皮成纤维细胞成骨分化的影响 １ ２ １ ３ １ ４ １ ５ １ 张　维 ，谭燃景 ，唐　辉 ，邱伟明 ，杨桂红 ，温旭红 ，闫洪涛 ，杨亚东 ，伍津津 　　（４０００４２重庆，第三军医 １ ５ ２ 大学大坪医院野战外科研究所：皮肤科 ，整形美容科 ；４０００１０重庆，重庆医科大学附属第二医院皮肤科 ；４３００７０武 ３ ４ 汉，广州军区武汉总院皮肤科 ；６１００８３成都，成都军区总医院皮肤科 ） 　　［摘要］　目的　通过准静态平面流场灌注系统，探讨不同流体剪切力对三维培养条件下人真皮成 ５ 纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法　将人真皮成纤维细胞按２×１０／ｍＬ密度接种于胶原水凝胶 支架中，同时设置低流速处理组（ｌｏｗｆｌｏｗｖｅｌｏｃｉｔｙｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ，ＬＦＶ组）和高流速处理组（ｈｉｇｈｆｌｏｗ ｖｅｌｏｃｉｔｙｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ，ＨＦＶ组）与三维静态培养的对照组（ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ）进行比较。第３、６天和９天对 各实验组进行ＨＥ染色并计数细胞；全程每隔３天测 １次培养基中葡萄糖的消耗量；第２１天行茜素红 染色观察各组诱导矿化情况，同时采用ＦＱＰＣＲ定量测定ＡＬＰ和ＢＭＰ２基因的表达。结果　３组细胞 均增殖明显，第６、９天ＬＦＶ组细胞增殖最多，组间比较差异均有统计学意义（Ｐ＜００５）；实验周期内各 组培养基的葡萄糖含量均呈下降趋势，但组间比较差异无统计学意义；第２１天茜素红染色３组均呈阳 性，矿化结节面积大小统计显示ＨＦＶ组最大，组间比较差异均有统计学意义（Ｐ＜００５）；ＡＬＰ和ＢＭＰ２ 基因表达量分别为ＬＦＶ组：（１．７８０±０．２３３）／（２．７８８±０．２４１）；ＨＦＶ组：（２．２６２±０．３０６）／（４．５７６± ０２５３）；对照组：（１．１４７±０２１５）／（０．３５４±０．０６３），组间比较差异均有统计学意义（Ｐ＜００５）。 结论　流体剪切力能促进人真皮成纤维细胞的增殖和成骨分化，且流体剪切力较小时有利于细胞增殖， 而较大时会在一定程度抑制细胞增殖。 　　［关键词］　人真皮成纤维细胞；灌注培养；流体剪切力；三维支架；成骨分化 　　［中图法分类号］　Ｒ３１８．０１；Ｒ３２２．９９；Ｒ３２９．２ ［文献标志码］　Ａ Ｆｌｕｉｄｓｈｅａｒｓｔｒｅｓｓａｆｆｅｃｔｓｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｄｅｒｍａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｎ ｔｈｒｅｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ １ ２ １ ３ １ ４ １ ＺｈａｎｇＷｅｉ，ＴａｎＲａｎｊｉｎｇ，ＴａｎｇＨｕｉ，ＱｉｕＷｅｉｍｉｎｇ，ＹａｎｇＧｕｉｈｏｎｇ，ＷｅｎＸｕｈｏｎｇ，ＹａｎＨｏｎｇｔａｏ，Ｙａｎｇ ５ １ １ ５ Ｙａｄｏｎｇ，ＷｕＪｉｎｊｉｎ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｌａｓｔｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｒｇｅｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ， ２ ＤａｐｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００４２；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄ