四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白转基因斑马鱼模型建立.docx

檵檵檵檵殝研究报告四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白 转基因斑马鱼模型建立 张力1 ，刘 檵檵檵檵殝 研究报告 四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白 转基因斑马鱼模型建立 张力1 ，刘超1 ，周昕2 ，谢英1 ，刘树锋1 ，徐增年1 * ( 1． 河北医科大学实验动物学部，河北省实验动物实验室，石家庄 050017; 华中科技大学同济医学院遗传学系，武汉 430032) 2． 【摘要】 目的 探索 tet-on 四环素诱导表达系统在斑马鱼体内应用策略与技术路线，构建四环素诱导肝脏特 异表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼，为条件型功能基因研究及组织特异转基因斑马鱼疾病模型的建立奠定基 础。方法 构建肝脏特异启动子 fabp10 启动 rtTA 蛋白表达的重组质粒 pfabp10-rtTA，联合 pTＲE-Tight-BI-AcGFP1 质粒转染 HeLa 细胞后给予 doxycycline 诱导，Western blot 法验证; pfabp10-rtTA 联合 pTＲE-Tight-BI-AcGFP1 质粒注 射斑马鱼 1-细胞期受精卵后，30 μg / mL doxycycline 诱导，荧光筛选稳定整合个体。结果 共转染 pfabp10-rtTA 与 pTＲE-Tight-BI-AcGFP1 的 HeLa 细胞经 1μg / mL 浓度 doxycycline 诱导培养液诱导，GFP 表达量显著高于不加 doxy- cycline 培养液对照组; 筛选获得的稳定整合斑马鱼幼鱼，在浓度为 30 μg / mL doxycycline 条件下，肝脏明显有绿色 荧光表达，对照组幼鱼肝脏位置未有明显绿色荧光。结论 Tet-On 四环素诱导表达系统可用于建立四环素调控斑 马鱼肝脏特异表达外源基因; 利用该技术可建立诱导肝脏表达 GFP 建立转基因斑马鱼品系，为建立条件型转基因 斑马鱼疾病模型、探索肝脏器官发生发育等研究提供良好的模式动物工具。 【关键词】 斑马鱼; 四环素诱导系统; 肝脏; 绿色荧光蛋白 【中图分类号】Q95-33 【文献标识码】A 【文章编号】1005-4847( 2015) 01-0081-05 Doi: 10. 3969 / j． issn． 1005 － 4847. 2015. 01. 015 Establishment of a transgenic zebrafish model with tetracycline-induced GFP expression in the liver ZHANG Li1 ，LIU Chao1 ，ZHOU Xin2 ，XIE Ying1 ，LIU Shu-feng1 ，XU Zeng-nian1 ( 1． Hebei Key Lab of Laboratory Animal Science，Hebei Medical University，Shijiazhuang 050017，China; 2. Department of Medical Genetics，Tongji Medical College; Huazhong University of Science and Technology; Wuhan 430032) 【Abstract】 Objective To explore the tetracycline-inducible expression system in zebrafish application strategy and build a transgenic zebrafish with tetracycline-inducible and liver-specific expression of green fluorescent protein． It is a fun- damental work to construct conditional gene function studies and tissue-specific transgenic zebrafish disease models． Meth- ods In this experiment pfabp10-rtTA was constructed with rtTA under the liver-specific promoter fabp10． pTＲE-Tight-BI- AcGFP1 and pfabp10-rtTA were co-transfected into HeLa cells to confirm the doxycycline induction，and after that t