实验五、显微直接计数法.pptxVIP

实验五酵母的显微镜直接计数  目的要求 1.了解血球计数板的结构及计数原理。 2.掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。 实验原理 测定微生物数量方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法、平板计数法和光电比浊计数法。 显微镜直接计数法 将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，又称血球计数板，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 血球计数板的构造 血球计数板的计算方法 血球计数板上刻有一长宽各为1毫米的方形大格，其体积为0.1mm3。计数板有两种刻度，一种是每大格分为16个中格，而每中格又分25个小格，每大格为16×25小格=400小格，而另一种，则是每大格分为25个中格，而每中格又分为16个小格，则每大格为25×16=400小格（计数板上的标识为XB·K25） 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。如果使用25 格× 16格规格的计数室除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。(6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和左方线上的酵母细胞(或只计数下方和右方线上的酵母细胞)。 计数公式 (1)16×25的血球计数板计算公式： 酵母细胞数／ml=（100小格内酵母细胞个数／ 100）×400×10000×稀释倍数 (2)25x16的血球计数板计算公式： 酵母细胞数／ml=（80小格内酵母细胞个数／80）×400×10000×稀释倍数 实验器材 显微镜、血球计数板、酵母菌液、盖玻片、吸管、吸水纸。 操作步骤 1. 镜检计数室 先检查计数板是否有破损，然后对计数板进行镜检，若有污物，则用自来水冲洗，用电吹风吹干后才能进行计数，并在显微镜下看清计数板结构。 2. 加 样 品 在血球计数板上盖上盖玻片, 用滴管将摇匀的酵母菌液由盖玻片边的小槽滴一小滴（不宜过多）,让菌液自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。 3. 计 数 静置几分钟后将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室的位置，再换高倍镜计数。 25个中格的取计数板四角和中间位置的五个中方格计菌数。重复计2-3次，取其平均值，按公式计算每毫升酵母菌液中菌体的个数。 4.清洗血球计数板 计数后将血球计数板用自来水冲洗干净，勿用硬物刷，吹干后镜检。若不干净，则必须重复洗涤干净为止。 注意事项 1、加样时先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生。 2、菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。 3、计数时，格线上的菌体只计左上或右下。 4、如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞一半及以上时作为2个菌体计算。 5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗，在水龙头上用水注清洗，直到洗净为止。 结果记录 第一个 中格 第二个 中格 第三个 中格 第四个 中格 第五个 中格 第一次 测 定 第二次 测 定 第三次 测 定 平 均 思 考 题 1. 直接计数法的原理与优缺点? 2.影响本实验结果的误差来源并提出改进措施? 按要求完成实验报告 值日生做好值日工作