检查方法与消毒灭菌.pptVIP

* * 一、细菌形态检查法 一）不染色标本检查法 活菌轮廓 动 力 单染色法 复染色法 鉴别染色法 革兰染色 抗酸染色 荚膜染色 鞭毛染色 芽胞染色 特殊染色法 二）染色标本检查法 原 理： 细胞壁结构学说 等电点学说 化学结构学说 革兰染色法（Gram Stain） 由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 涂 片 干 燥 固 定 染 色 水洗、吸干 镜 检 一、制备涂片标本 步 骤 二、染 色 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 复红复染 涂片固定 紫色——革兰阳性（G+）菌 红色——革兰阴性（G-）菌 （1）鉴别细菌 （2）选择药物 （3）与致病性有关 意 义 结 果 细菌学诊断 标本的采集和运送 避免杂菌污染 运送注意保存 不同期不同标本 抗菌素使用前 采集病变明显部位 标本必须新鲜 病原菌的检查程序 药物敏感试验 直接涂片镜检 分离培养 生化试验 血清学鉴定 动物试验 明确诊断 初步诊断 分子生物学技术 其他检测技术 观察菌落形态 染色镜检 原理 双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高≥4倍者方有意义 结果判断 血清学的诊断 -- 已知抗原检测未知抗体 -- 效价高低 -- 动态观察 种 类 凝集试验 -- 肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等 中和试验 -- 梅毒VDRL、RPR试验等 沉淀试验 -- 抗“O”试验等 补体结合试验 -- Q热柯克斯体抗体检测等 杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 消毒 disinfection 灭菌 sterilization 无菌 asepsis 防腐 antisepsis 防止或抑制体外细菌生长繁殖 不含活菌 杀死物体上的所有微生物 无菌操作 抹布上的细菌 菜板上的细菌 ? 热力灭菌法 一、物理消毒灭菌法 焚烧----最彻底的灭菌方法 烧灼----直接用火焰灭菌方法 干烤----加热160-180℃ 2小时 干热(dry heat)灭菌法 杀菌机理： 高温使菌体蛋白凝固变性 红外线----热效应只在照射表面产生 微波----热效应具有一定的穿透性 湿热(moist heat)灭菌法 加压蒸汽灭菌法 最有效的灭菌方法121℃ 煮沸消毒法 水煮100℃5分钟(繁殖体)-2小时(芽胞) 流通蒸汽消毒法 巴氏消毒法 间歇蒸汽灭菌法 水蒸汽100 ℃15-30分钟(繁殖体) 反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌 较低的温度（61℃30分钟）杀灭致病菌 20-30分钟 湿热灭菌与干热灭菌的比较 同一温度下，湿热比干热灭菌效果好 原因 1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 2、湿热的穿透力比干热大 3、湿热的蒸汽有潜热 辐射杀菌法 紫外线 杀菌机理： 波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用 干扰DNA的复制与转录 紫外线穿透力较弱 特点： 应用范围： 空气及不耐热物品的表面消毒 光复活作用及光复活酶 杀菌机理： 应用范围： 电离辐射 包括高速电子、X射线和 γ 射线 产生游离基,破坏DNA。 一次性医用塑料制品的消毒 食品的消毒不破坏其营养成分 超声波杀菌法 超声波 杀菌机理： 频率高于20kHz/s而不被人耳感觉到的声波 过水时的空化作用（空穴效应） 特点： 应用范围： 粉碎细胞，提取细胞组分 革兰阴性菌较为敏感 滤过除菌法 用机械性阻挡除去液体或空气中的细菌 滤菌器 含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体通过, 而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 适用范围 血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌 滤菌过程 低温与干燥 在低温状态下真空抽去水分 用途：保存菌种 冷冻真空干燥法：