补体检测及应用.docVIP

--WORD格式--专业资料--可编辑-- -- 第十九章 补体检测及应用 补体是一组存在于人和脊椎动物血清、组织液或某些细胞膜上的具有酶样活性、不耐热的糖蛋白。补体不是单一成分，其在功能效应上是以连续反应的程序进行的，故又称补体系统。补体系统广泛参与机体的抗感染防御反应及免疫调节，也可介导免疫病理的损伤性反应，是体内具有重要生物学作用的效应放大系统。补体的存在与抗原性异物的刺激无关，在正常人血清中，其含量相对稳定，但在某些疾病发生时，补体的含量及其活性可发生改变。因此，补体含量与活性的检测，对机体免疫状态的评价和疾病的诊断具有重要意义。 第一节 概述 一、补体成分的含量与理化特性 （一）补体成分的含量： 补体大多为糖蛋白，属于 β球蛋白， C1q、C8 等为 γ 球蛋白， C1s、C9 为 α 球 蛋白。 C3 含量最高。 补体活化后的裂解片段以该成分的符号后加小写英文字母表示，通常 a 为小片段， b 为大片段，但 C2a 为大片段， C2b为小片段。 补体各成分活化后不参与溶细胞过程的裂解片段， 同样具有其他对机体利弊兼有 的生物学活性，故裂解片段的测定，一方面可反映机体补体的活性状态，另一方面也是某些疾病诊断不可 或缺的指标。补体系由非均一的细胞群体产生，在排除补体消耗太多的前提下，补体缺陷也可反映这些细胞的状态。体内合成补体成分的部位和细胞有多种，以肝脏、脾脏、小肠等组织和巨噬细胞、上皮细胞、血小板等细胞为主。 （二）补体的理化特性：补体的性质不稳定，易受各种理化因素的影响，加热、紫外线照射、机械振 荡、酸碱和酒精等因素均可破坏补体。在 -10 ℃活性保持 3～ 4 天，冷冻干燥可较长时间保持其活性，加热 56℃ 30 分钟灭活（灭能），故补体活性检测应尽快进行。标本保存应置于 -20 ℃ 以下。 二、补体的活化途径 补体蛋白通常以活化蛋白前体存在于体液中，在不同激活物的作用下，补体各成分可循不同的途径依 次被活化，形成一系列级联反应，表现出生物活性，最终导致溶细胞效应。 经典途径：以抗原 - 抗体复合物结合 C1q启动激活，是抗体介导的体液免疫应答的主要效应方式。 2.MBL 途径：是甘露聚糖结合凝集素（ MBL）结合至细菌启动的途径。其诱导物或激活剂是机体的炎症 反应急性期时相性蛋白产生的 MBL和 C 反应蛋白等，后者与病原体结合而启动绕过 C1 的 MBL途径。 3. 旁路途径：是通过微生物表面等膜性物质， 从 C3 开始 ，由 B 因子、 D 因子参与激活过程，也称第二 途径、旁路途径。这种激活方式不依赖于特异性抗体的形成， 在感染早期可为机体提供有效的防御机制。 在机体抗感染过程中，首先活化和发挥作用的补体途径，是不依赖抗体的旁路途径和 MBL途径。而在 特异性抗体产生时，经典途径方可发挥作用。 第二节 补体总活性测定 血清补体总活性的测定，是对 激活后补体 最终效应的检测方法，可借此反映补体的整体功能。 以红细 胞的溶解为指示，以 50%溶血为判断终点，故称 CH50。包括：基于经典途径的 CP-CH50和应用于 C3旁路检 测的 AP-CH50。 CP-CH50是临床常规进行的补体总活性检测项目。 通常述及的 CH50系指 CP-CH50。 一、 CH50测定法的原理 补体最主要的活性是溶细胞作用。特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细胞肿胀导致溶血。补体溶血程度与补体的活性相关，但非直线关系。溶 血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的 S 形曲线。 以溶血百分率为纵坐标， 相应血清量为横坐标。 S 形曲线在 必威体育精装版各类医学考试课程联系 Q30%～ 70%之间几乎呈直线， 即曲线此阶段对补体量的变化非常敏感。 因此，实验常以 50%溶血作为终点指标， 它比 100%溶血更为敏感，这一方法称为补体 50%溶血实验，即 CH50。 二、 CH50测定方法 红细胞浓度的调整 溶血素滴定 稀释缓冲液：磷酸缓冲液或巴比妥缓冲液等均可用于溶血试验。 4.50%溶血标准管：做 CH50试验时，应同时配制 50%溶血标准管。 5.50%溶血总补体值的计算 三、方法评价与临床意义 CH50测定补体活性，方法简便、快速，虽敏感性较低，但可以满足对血清补体含量测定的要求。影响 补体活性测定结果的因素较多，诸如反应所用的缓冲液、 SRBC的数量和状态、反应温度、 pH、离子强度以及反应容器的洁净程度等。 该法主要检测的是补体经典途径的溶血活性，所得结果反映补体 C1～ C9 等 9 种成分的综合水平。如果 CH50测定值过低或者完全无活性，应考虑补体缺陷；可再通过 C4、C2、 C3和 C5 等单个补体成分的检测， 区别是否因某一成分缺乏所致，以便做出确