高致病性禽流 感疫情处置技术规范(试行).pdfVIP

高高致致病病性性禽禽流流感感疫疫情情处处置置技技术术规规范范 （（试试行行）） 第一项　样品采集、保存及 输技术规范 　　采集、保存和 输样品应当符合下列要求，并填写采样单。 　　一、样品采集 　　 （一）病禽 　　1.至少从5只濒死禽采集样品。样品包括：泄殖腔拭子和气管拭 子 （置于缓冲液中）各5个 （小珍禽可采集新鲜粪便）；气管和肺 的混样5个，肠管及内容物的混样5个；肝、脾、肾和脑等组织样品 （不能混样）各5个。 　　2.分别采集至少10个病鸡的血样 （急性发病期血清）。 　　 （二）病死禽 　　无发病禽时，可从死亡不久的病禽采样，采样要求同病禽。 　　棉拭子单独放入容器，容器中盛放含有抗菌素的pH值为7.0－ 7.4的PBS液。抗生素的选择视当地情况而定，组织和气管拭子悬液 中加入青霉素 （2000IU/mL）、链霉素 （2mg/mL）、庆大霉素 （50μg/mL）、制霉菌素 （10000IU/mL）。但粪便和泄殖腔拭子所 用的抗生素浓度应提高5倍。加入抗生素后pH值应调至7.0－7.4。 　　二、样品保存和 输 　　血样要单独存放，不能混合。 　　样品应密封于塑料袋或瓶中，置于有制冷剂的容器中 输，容 器必须密封，防止渗漏。 　　样品若能在24小时内送到实验室，冷藏 输。否则，应冷冻 输。 　　若样品暂时不用，则应冷冻 （最好－70℃或以下）保存。 采采样样单单 样品名称 　 样品编号 　 采样基数 　 采样数量 　 采样 日期 　 保存情况 冷冻 （藏） 被采样单位 　 通讯地址 　 联系电话 　 邮编 　 被采样单位盖章或签名　　　 采样单位盖章　　　　 　 采样人签名　　　　 　　年　月　 日 　　年　月　 日 备注 　　此单一式三份，第一联存根，第二联随样品，第三联由被采样 单位保存 第二项　血清学诊断技术规范 　　一、血凝 （HA ）和血凝抑制 （HI ）试验技术 　　 （一）材料准备 　　1.96孔V型微量反应板，微量移液器 （配有滴头）。 　　2.阿氏 （Alsevers）液、鸡红细胞悬液，配制方法见附录A 。 　　3.pH7.2的0.01mol/L磷酸盐缓冲液 （PBS）。 　　4.高致病性禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清以及阴 性血清。 　　 （二）操作方法 　　1.血凝 （HA ）试验 （微量法） 　　 （1）在微量反应板的1－12孔均加入0.025mL PBS，换滴头。 　　 （2）吸取0.025mL抗原加入第l孔，混匀。 　　 （3）从第1孔吸取0.025mL抗原加入第2孔，混匀后吸取 0.025mL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取 0.025mL弃之，换滴头。 　　 （4）每孔再加入0.025mL PBS。 　　 （5）每孔均加入0.025mL 1% （V/V ）鸡红细胞悬液 （将鸡红细 胞悬液充分摇匀后加入）。 　　 （6）振荡混匀，在室温 （20℃－25℃）下静置40min后观察结 果 （如果环境温度太高，可置4℃环境下1hr ）。对照孔红细胞将成 明显的钮扣状沉到孔底。 　　 （7）结果判定。将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。 完全血凝 （不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位 （HAU）。 　　2.血凝抑制 （HI ）试验 （微量法） 　　 （1）根据血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的 病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗 原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1：256，则4HAU抗 原的稀释倍数应是1：64 （256除以4）。 　　 （2）在微量反应板的1－11