鼠疫病原学与鼠疫实验室管理和运行.pptVIP

Ⅱ级生物安全防护水平（BSL-2）：标准的BSL-2实验室除了满足BSL-1的要求以外，在门上增加生物危险标志、Ⅱ级生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、安全离心机罩帽、防溅罩或眼罩、冼眼器等。 1）使用设计原则： ① 必须为实验室安全运行、清洁和维护提供足够的空间。应设有各自独立的个人办公室、辅助实验室（存储与实验准备间）、操作实验室。 ② 实验室门应带锁并可自动关闭。实验室门应有可视窗，门口应设有防止节肢动物和啮齿动物进入的设施。门上贴有符合要求的BSL-2实验室危险标志。如应用窗户自然通风，应有防虫纱窗。 ③ 每个实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、耐化学药品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑，不得铺地毯。 ④ 实验台应防水，耐腐蚀、耐热。实验室中的厨柜和实验台应牢固。厨柜、实验台之间应保持一定距离，以便于清洁。 ⑤ 在实验室门口应设有挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。在实验室内应穿专门工作服；戴乳胶手套。 ⑥ 实验室应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。 ⑦ 有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应设专用电源。 ⑧ 应在实验室内配备生物安全柜，生物安全柜应安装于人走动少的地方，不应安装在门口。生物安全柜的背面、侧面与墙壁之间的距离宜保持不小于150~300 mm的检修距离，顶部也应留有不小于300 mm的空间。 ⑨ 应有适当的消毒设备，在靠近实验室的位置配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。 2）县级BSL-2建设要求： ① 设施要求：要满足上述通用要求，可在公用实验室区域选取足够的房间，一间作为工作人员的办公室兼作个人物品存放和仓储,按进入次序依次为准备间，面积适宜；最后是操作感染性材料的实验室，面积30 km2左右为宜（详见通用要求）。 ② 装备要求：有条件的在BSL-1和BSL-2实验室都应设置通风厨或负压罩，用作有害气体、化学物操作；必须安装生物安全柜，用于操作感染性材料中容易产生气溶胶和喷溅的操作。建议选用CLASSⅡ级安全柜，符合国际分级标准；配备高压蒸汽灭菌器和生化培养箱。 （三） 鼠疫BSL-2实验室的管理 1、生物安全管理 (1)实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。 (2)实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规的实验室安全培训。(3)要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程。实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求。实验室内应备有可供取阅安全或操作手册。(4)应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。(5)如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并应妥善保存相应的医学记录。 3 染色 分别用革兰氏染液、美兰染液进行染色。 1）革兰氏染色 将结晶紫染液加于已固定的标本上，染1分钟； 水洗后用卢戈氏碘液染1分钟； 水洗后用95%酒精脱色约0.5～1分钟，将玻片轻轻摇动直到无紫色继续脱落为止； 水洗后用稀释石碳酸复红复染1分钟，水洗待干。 2）美兰染色 将染液加在已固定的涂片上，染3～5分钟，然后再水洗，待干，镜检。 4 镜检 在显微镜下，查找典型鼠疫菌，即两端钝园、两极浓染、卵园形，革兰氏阴性小杆菌（菌体长1～2um,宽0.5～0.7um）。显微镜标本对鼠疫菌的鉴别诊断有一定帮助，仅根据鼠疫菌的形态，不能做最后确诊。 Ⅱ 细菌培养 鼠疫菌培养可根据待检标本的种类和新鲜程度选用不同的培养基进行分离培养，腐败材料最好经皮感染实验动物，待接种动物死亡或7日处死后取材培养。 1 培养基:培养基是细菌培养获得准确结果的基础,必须在营养成分、酸碱度、透明度及高压灭菌等方面严格把关。并进行质量控制。 细菌学监测中常用培养基有： 1）营养琼脂培养基： 一般市场有售，按说明溶解于蒸馏水中，按一定量分装克氏瓶内，15磅30 min高压灭菌后倒制平板备用。 2）LB培养基： 胰蛋白胨10 g、酵母粉5 g、氯化钠 5 g、琼脂粉6 g（不同生产厂家的琼脂粉加量不同，需做预试验确定加入量）、蒸馏水1 000ml。 制备时将所有成分加热溶解，用1 N氢氧化钠将pH调至7.2；分装克氏瓶内，每瓶约300 ml； 15磅30 min高压灭菌；待克氏瓶中培养基冷却至50℃左右，无菌条件下倒制平板，每个平板倒入约15 ml，分离细菌时使用。 3）琼脂斜面：将上述溶化好