急性冠状动脉综合征患者血管新生与循环内皮细胞的研究-生物医学工程专业论文.docx

中国垃和医科大学中国医学科学院博士学位论文Ang一1 中国垃和医科大学中国医学科学院博士学位论文 Ang一1 Angiopoiefin一1 血管形成素一1 sTie．2 Soluble Tie-2 receptor 可溶性Tie一2受体 Recombinant human soluble Tie．2／Fc重组人可溶性Tie．2／Fc嵌合 Tie．2／Fc chimera 体蛋白 VEGF Vascular endothelial growth factor 血管内皮细胞生长因子 ACS Acute coronary syndrome 急性冠状动脉综合征 AMI Acute myocardial infarction 急性心肌梗死 UA Unstable angina 不稳定型心绞痛 oPC一皿 Optical proteinchip based on imaging基于椭偏光学生物传感器 eUipsometry 原理的光学蛋白质芯片 ELISA Enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附分析 HUVECs Human umbilical vein endothelial cells 人脐静脉内皮细胞 ACEI Angiotensin covert enzyme inhibitor 血管紧张素转换酶抑制剂 CECs Circulating endothelial cells 循环内皮细胞 CRP C—reactive protein C反应蛋白质 IL．6 Interleukin 6 白介素．6 TNFa Tumor necrosis factor alpha 肿瘤坏死因子a EM口S Endothelial microparticles 内皮细胞微粒体 MTT 3一(4，5-dirnethyl-2-thiazolyl)-2，5一diphenyl-3-(4，5一二甲基-2一噻唑)2，5-二 2H-tetrazolium Bromide 苯基溴化四唑 DTT Dithiothreitol 二硫苏糖醇 PBS Phosphate buffer saline 磷酸盐缓冲液 中国协和医科大学中田医学科学院博士学位论文中文摘要 中国协和医科大学中田医学科学院博士学位论文 中文摘要 目的：第一部分； (1)探讨急性心肌梗死(AM】)患者血清中血管内皮生长因子 (VEGF)、血管形成素-1(Ang-1)及可溶性酪氨酸激酶受体Tie．2(sTie一2)的浓度 变化；(2)根据检测结果，体外应用重组VEGF、Ang，1蛋白及重组人可溶性Tie一2／Fc 嵌合体蛋白(Tie-2停c)，观察其对内皮细胞存活及管状形成的影响及可能的信号传导 途径，推测AMI急性期血管新生的状况；(3)构建血清sTie．2检测用蛋白质光学芯片， 探讨将光学蛋白质芯片检测法(OPC．IE)用于检测sTie．2浓度的可行性。第二部分： (1)应用携带抗CDl46抗体的免疫磁珠分离计数AMI及不稳定心绞痛(UA)患者外 周血中循环内皮细胞(CECs)；(2)探讨CECs与疾病及炎性相关因子C反应蛋白质 (CRP)、白细胞介素一6(IL-6)及肿瘤坏死因子d(TNFa)的关系，探讨其产生的 可能机制；(3)根据第一和第二部分的结果，探讨AMI时血清sTie．2浓度升高与内度 细胞损伤的关系。 方法：(1)ELISA法检测耻讧I患者(入院当天、发病48h、72h及7d时分别取血) 和健康对照组血清中VEGF、Ang-1及sTie一2浓度变化；(2)体外培养人脐静脉内皮 细胞(姐髓cs)，应用MTT法、Hoeehst33342染色及Armexin V／PI双染法检测重组 VEGF、Ang．1及不同浓度Tie．2／Fc对内皮细胞存活的影响；(3)构建3D凝胶，评价 各种干预对内皮细胞管状形成的影响；(4)收集细胞，应用Western blotting检测重组 VEGF、Ang．1及Tie．2／Fc对内皮细胞磷酸化Tie-2受体和蛋白激酶B(Akt)蛋白表 达的影响。收集细胞培养上清液检测NO浓度变化，探讨可能的信号传导途径；(5)构 建sTie．2检测用光学蛋白质芯片，使用OPC．IE法检测以上研究对象血清中sTie．2浓 度；(6)A／vii及uA患者入院时取静脉血抗凝，用携带抗CDl46抗体的免疫磁珠分离 外周血中的CECs。将已知数量的HUVECs混合于全血中，用于检测免疫磁珠分离的 效果；荧光显微镜下计数；遗传性血友病因子(vWF)、CD31免疫组化及透射电镜 对分选细胞进行内皮源性鉴定；(7)应用Annexin V-FITC／PI双染法检测CECs的凋亡 状态；(8)免疫透射比浊法或酶联免疫法检测血清中各种炎性相关因子的水平。 结果：