家蚕表达猪繁殖与呼吸综合征疫苗蛋白E和M的研究-特种经济动物饲养专业论文.docxVIP

摘 任 摘 任 石 弓 ( 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 是 由 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 病 毒 (P or c ine R 即 ro du ct ive an d R e sp ir a to r y S yn dr om e V ir u s ， PR RS V ) 引起 的 一 种 严 重 危 害 养 猪 业 的 新 传 染 病 。 I泊床 上 以妊 娠 母 猪 流 产 、死 胎 、木 乃 伊 胎 、弱 仔 等 繁 殖 障 碍 以及 仔 猪 的 呼 吸 道 症 状 和 高 死 亡 率 为 特 征 。P RRSV 属 动 脉 炎 病 毒 科 ，系 单 股 正 链 RNA 病 毒 ， 基 因 组 大 小 为 15 kb ， 包 括 8 个 开 放 阅读 框 ，可 编 码 6种 结 构 蛋 白和 2种 非 结 构 蛋 白 ，其 中ORFS 编 码 病 毒 的 糖 基 化 包 膜 蛋 白 (GP S 蛋 白 ，又 称 E 蛋 白) ，是 主 要 的 结 构 蛋 白 ，也 是 一 种 多 功 能 蛋 白 ，参 与 细 胞 免 疫 与 体 液 免 疫 ; O R F6编 码 基 质 蛋 白 ( 又 称 M 蛋 白 )， 为 非 糖 基 化 蛋 白 。 由OR F6 、O RF S分 别 编 码 的 M 、E 蛋 白是 PRRSV 是 病 毒 的 主 要 结 构 蛋 白 ，它 们 在 病 毒 的 致 病 性 、病 毒 复 制 、病 毒 装 配 、 病 毒 变 异 和 保 护 性 反 应 等 方 面 可 能 具 有 重 要 意 义 ，是 发 展 新 型 疫 苗 的 良好 目标 基 因 。 杆 状 病 毒 表 达 载 体 系 统 (b acu lov irus ex p ression v eetor system ，B E V S ) 被 广 泛 应 用 于 重 组 蛋 白的 表 达 ，并 且 已经 成 功 表 达 了大 量 的 蛋 白质 。该 系 统 表 达 有 着 独 特 的 优 势 ， 比 如 ，在 大 肠 杆 菌 中 不 能 表 达 的 真 核 生 物 蛋 白 ， 都 能 在 B E V S 中 表 达 。 而 且 该 系 统 还 可 以 在 昆虫 细 胞 中 对 重 组 蛋 白进 行 翻 译 后 的 加 工 修 饰 ，使 表 达 的 真 核 蛋 白具 有 与 天 然 产 物 几 乎 相 同 的 生 物 活 性 。 最 近 ， 研 究 人 员 开 发 出 了 一 种 针 对 B m N P V 的 b acm id (杆 状 病 毒 穿 梭 载 体 ) 的 表 达 系 统 。B m N P V b acm id可 以像 质 粒 一 样 在 大 肠 杆 菌 E.。ol冲 复 制 ，并 保 持 其 对 昆虫 细 胞 的 感 染 能 力 。由 于 这 种 技 术 大 大 缩 短 了病 毒 纯 化 和 扩 增 的 周 期 ，从 而 明 显 减 少 了筛 选 病 毒 在 技 术 上 的 困难 和 时 间 上 的 要 求 。重 组 蛋 白在 家 蚕 体 内 的 表 达 水 平 比 在 其 细 胞 系 中 要 高 出 10 一10 0 倍 ，足 以 说 明 利 用 家 蚕 规 模 化 生 产 重 组 蛋 白非 常 理 想 ，是 理 想 的 真 核 蛋 白生 物 反 应 器 。 本 研 究 通 过 对 目前 广 泛 应 用 的 杆 状 病 毒 B ac 一t。一Ba c 表 达 系 统 进 行 改 造 ， 建 立 了 能 简 便 、快 速 获 得 重 组 杆 状 病 毒 的 表 达 系 统 ，并 通 过 这 一 改 造 的 系 统 使 P R R sv O R FS 、o R F6 基 因在 家 蚕 细 胞 中 获 得 高 效 融 合 表 达 ， 为 深 入 研 究 O RF S 基 因 的 功 能 以 及 研 制 PR RS V 的 新 型 疫 苗 与 诊 断 试 剂 奠 定 了 基 础 。 同 时 将 O RFS 、O RF 6 基 因 连 接 起 来 ， 从 而 为 新 的 基 因 免 疫 效 应 的 研 究 作 出 新 的 尝 试 。 关 键 词 : 家 蚕 ; B ac 一To 一B ac 表 达 系 统 ; 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 (P R R sv ) ; G PS (E 蛋 白); M 蛋 白 。 E x E x p re ssio n o f G p s ( E ) a n d M p ro te in s o f p o re in e re p ro d u e tiv e a n d resP irato ry sy n d r