家蚕发育相关基因Bmvlg和Bmvis的研究-遗传学专业论文.docxVIP

苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定， 苏州大学学位论文使用授权声明 本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定， 即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸 质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献 信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、 中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子 文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索。 涉密论文口 本学位论文属 在——年一月解密后适用本规定。 非涉密论文口 论文作者签名： 毯瑶瑶日期： 导师签名：!翌Z望 日期： -← 家蚕发育相关基因Bmvl#和Bmvi$的研究 家蚕发育相关基因Bmvl#和Bmvi$的研究 中文摘要 中文摘要 原生殖细胞(primordial germ cells，PGCs)是一种来源于胚胎原始生殖嵴并 具有多向分化潜能的干细胞，是二倍体生物生殖细胞的前体，只短暂的存在于胚 胎中，最终分化发育为生殖细胞。对于原生殖细胞的深入研究，对于体外胚胎发 育研究、基因研究、基因组学研究、药物筛选等具有重要意义。vasa基因最早在果 蝇中发现，它对极颗粒的形成和生殖细胞的发育起着至关重要的作用，已有研究 表明，vasc／基因突变的个体将不能生成生殖细胞。在绝大多数物种中，vast／基因高 度保守，且仅限在生殖细胞中特异性表达，因此它可以作为一种分子标记用于研 究配子发生及原生殖细胞的起源、迁移、分化等。 为了进一步研究家蚕生殖发育的机制，我们对家蚕vasa—like gene基因(Bombyx mori vasa-like gene，Bmvlg)的功能做了初步研究，构建了由Bmvlg启动子驱动的 t≥mvlg和DsRed的融合表达转基因载体，通过精子介导法获得了转基因家蚕，荧 光显微镜观察可检测到明显的荧光蚕，表明转基因家蚕构建成功，同时在家蚕的 未受精卵中可观测到绿色荧光和红色荧光，表明8mvlg是一种母源性基因。将 t≥mvlg基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中，在E coli中成功表达了BmVLG， 并利用镍离子柱纯化的重组蛋白免疫小鼠制备了多克隆抗体；利用该抗血清的 western blotting分析结果显示，在家蚕精巢和卵巢中检测到了大小约为70 kDa特 异性条带；免疫荧光细胞定位结果显示，BmVLG蛋白主要在BmN培养细胞中的 细胞质中表达：qRT-PCR结果显示，BmVLG基因在家蚕四龄和五龄的性腺中均有 表达，且无明显差异。这些结果为进一步研究BmVLG的功能奠定了基础。 Vis(Vismay)属于TGIF家族，在果蝇中的研究表明，Vis缺失的果蝇突变体 能够存活，但是雄性果蝇表现出不育的表型，已有研究表明Vis是一种减数分裂阻 滞基因。在家蚕中通过RT-PCR克隆了长度为847 bp的1，西基因(Bmvis)片段， 并对其进行了结构分析和进化树分析；在家蚕各种组织中的表达检测显示，Bmvis 基因仅在家蚕的精巢中表达；亚细胞定位分析显示BmVis蛋白在细胞核和细胞质 中均匀表达，但主要分布在细胞核中。研究结果为深入了解家蚕中BmVis的功能 奠定了基础。 关键词：家蚕；细胞定位；q．PCR；转基因；红色荧光蛋白 作 者：张瑶瑶 指导教师：曹广力贡成良薛仁宇 Studies Studies on the Reproductive Development-·Related Gene Bmvlg and Bmvis in Silkworm，Bombyx mori Abstract Primordial germ cells(PGCs)are stem cells originating from primitive germ crest of embyo with the ability to generate multiplex differentiated cells．Which only exists in the emb),o for a short time is the precursor of diploid organisms germ cells，and then finally can differentiate into germ cells．The further study of PGCs had a