过量碘对甲状腺的影响及硒的干预作用研究-营养与食品卫生学专业论文.docxVIP

华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 博十学位论文 水平与正常组比较无显著性差异，但是只有O．1～O．4mg／L补硒组D1活性与正常 组无显著性差异：⑥0．1～O．75mg／L补硒组甲状腺TPO mRNA水平与『F常组比较 差异无显著性，但是只有0．1--0．3mg／L补硒组TPO活性与正常组比较差异无显 著性。 结论通过动物研究发现：①过量碘对甲状腺激素代谢过程的影响主要表现 为：氧化，抗氧化水平失衡，脱碘酶和TPO的活性和mRNA水平下降。②过量碘 通过降低机体GSH．Px，TPO和D1的活性，导致甲状腺激素合成和分解受到影 响，导致激素水平失衡和甲状腺肿大。③补充硒对过量碘导致的硒营养水平低下， 氧化，抗氧化水平失衡，脱碘酶、TPO活性和mRNA水平下降都有有效的干预作 用。合适的硒干预剂量范围是O．2～O．3mg／L(0．05 mg／kg·bw-4)．075mg／kg bw)。 第二部分过量碘对FRTL 细胞的影响及硒的干预作用研究 目的观察过量碘对FRTL细胞的组织蛋白酶活性和mRNA水平、氧化／抗 氧化平衡、细胞凋亡以及细胞凋亡相关基因bcl一2和bax的mRNA和蛋白质水平 变化，并观察不同剂量硒对过量碘引起这些指标变化的干预作用。从而进一步深 入探讨过量碘性胶质潴留的发生机制。 方法FRTL细胞培养于Kaighn’S改良的Ham’S F一12培养基，培养基内添 加6种激素：1mU／ml牛促甲状腺激素，O．01mg／ml胰岛素，10nmol／L氢化可 的松，0．005 mg／ml转铁蛋白，10 ng／ml生长抑素和10 ng／ml甘氨酰一组氨酰赖氨 酸。测定下列指标：①琼脂糖凝胶电泳法观察碘化钾(potassium iodide，KI)对 FRTL细胞DNA的损伤以及硒的干预作用。细胞分为4组：正常对照组：培养 基内不加碘或硒；过量碘组：培养基内加入Ⅺ，浓度为10rnmol／L；单硒组：培 养基内加入Na2Se03，浓度为0．1¨mol／L Na2Se03；过量碘补硒组：培养基内含 10mmol／L KI和0．1lamol／L Na2Se03。收集细胞，提取DNA，琼脂糖凝胶电泳， 观察DNA电泳条带。②流式细胞术测定细胞内活性氧(reactive oxygen species， ROS)含量。细胞分组：正常对照组：培养基内不加碘或硒；过量碘组：培养基 内加入Ⅺ，浓度为1，5，10，50和100mmol／L；单硒组：培养基内加入亚硒酸 钠，硒浓度分别为O．1，0．5，1．0，2．0和5．0／unol／L；过量碘加硒组：培养基内加 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 l尊十学位论文 入10mmol／L KI和不同浓度硒，硒浓度分别为0．1，0．5，1．0，2．0和5 09mol／L。 收集细胞，流式细胞仪FL一1 530nm测定。③流式细胞仪测定细胞凋亡率。细胞 分组：正常对照组：培养基内不加碘或硒；过量碘组：培养基内加入KI，浓度 为1，5，10，50和100mmol／L；过量碘加硒组：培养基内加入10mmol／L KI和 不同浓度Na2Se03，硒浓度分别为O．1，0．5，1．0和5．09mol／L。收集细胞，Annexin V—FITC／7．AAD染色法测定细胞凋亡率。④测定CB、CD、bcl一2和bax mRNA 的水平。细胞分组：正常对照组：培养基内不加碘或硒；过量碘组：培养基内含 10mmol／L KI(bcl一2和bax)或50mmol／L KI(CB和CD)；单硒组：培养基内 加入Na2Se03；浓度为0．1p．m01／LNa2Se03；过量碘补硒组：培养基加入10mmol／L KI(bcl．2和bax)或50mmol／L KI(CB和CD)和O．19mol／L Na2Se03。收集细 胞，荧光定量PCR测定CB、CD、bcl一2和bax mRNA的水平。⑤测定凋亡相关 基因bcl．2和bax蛋白水平。细胞分组：正常对照组：培养基内不加碘或硒；过 量碘组：培养基内含10mmol／LKl；单硒组：培养基内加入0．19mol／LNa2Se03； 过量碘补硒组：培养基内加入10mmol／L KI和0．19mol／L Na2Se03。收集细胞， Westernblot测定bcl一2和bax蛋白水平。⑥CB、CD活性的测定。细胞分组：正 常对照组：培养基内不加碘或硒；过量碘组：培养基内加入不同剂量KI，浓度 分别为1、5、10、50和100mmol／