贵州苗药艾纳香DNA条形码的鉴定研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

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2019-04-05 发布于上海
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贵州苗药艾纳香DNA条形码的鉴定研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

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魏妮娜遵魏妮娜遵义医学院硕士学位论文万方数据万方数据贵州苗药艾纳香 DNA 条形码的鉴定研究中文摘要目的：应用 DNA 条形码对贵州苗药艾纳香及其混伪品进行鉴定，以确定 DNA 条形码技术在中药鉴定中的有效性。方法：分别提取艾纳香及其混伪品的 DNA，对其 DNA 中 ITS、psbA-trnH、matK、 rbcL 序列进行 PCR 扩增和测序，应用 CodonCode Aligner V3.0 对测序峰图进行校对拼接，去除低质量序列及引物区，获得靶序列。应用 MEGA5.0 软件计算物种种内种间 Kimura2-parameter (K2P)遗传距离；采用相似性有哪些信誉好的足球投注网站法、最近距离法、构建 NJ 系统发育树等方法对候选序列进行鉴定分析。结果：获得苗药艾纳香的ITS、psbA-trnH完整序列及rbcL、matK部分序列；苗药艾纳香ITS、ITS2、psbA-trnH三个序列的种间最小K2P遗传距离远大于种内最大K2P遗传距离；基于三个序列构建的NJ系统发育树中可看出，艾纳香与其近缘种单独聚为一枝，表现出单系性，能明显与伪品大叶紫珠分开。结论：相对于rbcL、matK、psbA-trnH序列，ITS2序列最适合用于鉴别艾纳香及其近缘种和伪品，为有效鉴定艾纳香提供了科学依据。关键词：艾纳香；ITS 序列；ITS2 序列；rbcL 序列；matK 序列；psbA-trnH 序列 2 The Identification of Miao medicine Blumea blasamifera by DNA barcoding Abstract Objective: Apply DNA barcode to identify Miao medicine Blumea balsamifera, its closely related species and adulterants, to determine the validity of identification in Chinese herbs. Methods: Total genomic DNA was isolated from B.blasamifera and adulterants. Nuclear DNA ITS, psbA-trnH, matK, rbcL sequences were amplified and purified PCR products were sequenced. Sequences assembly and consensus sequence generation were performed using the CodonCode Aligner V3.0. The Kimura 2-Parameter (K2P) distances were calculated using the MEGA5.0. Identification analyses were performed with using BLAST1, nearest distance (ND) and neighbor-joining (NJ) methods. Results: The ITS and psbA-trnH complete sequence, rbcL and matK partial sequence of B.blasamifera were got. K2P genetic distance between species within is much larger than the smallest species of the largest K2P genetic distance ITS, ITS2, psbA-trnH three sequences from closely related species and their adulterants. NJ tree was constructed based on the three sequences, B.blasamifera their relatives were clustered together, and they were monophyletic, obviously with adulterants Callicarpa macrophylla. Conclusion: Compared with the rbcL, matK, psbA-trnH sequence, ITS2 sequences is suitable for identification of Miao medicine B.blasamifera it