电化学发光法测定食品中四环素总量【开题报告】.docVIP

开题报告 应用化学 电化学发光法测定食品中四环素总量 一、选题的背景与意义 四环素类(tetracyclines,TCs)抗生素分子式为C22H26N2O7，分子量430.45，具有十二氢化并四苯基结构，是一种广谱抗菌药物。由于具备抗菌谱广以及价格低廉等优点 ,已被广泛应用于畜禽、水生动物和蜜蜂养殖中，用于预防和治疗多种感染性疾病、促生长、提高饲料转化率等。常用的 TCs主要有：四环素(tetracycline,TC)、金霉素(chlortetracycline,CTC)、土霉素(oxytetracycline,OTC)、 强力霉素(doxycycline,DC)等。人们长期食用含有这类药物的动物产品及其制品，会严重危及人类的身体健康。四环素类药物的毒性反应主要表现在对胃、肠、肝、肾的损害以及对牙齿和骨骼的破坏，最显著的残留毒性是诱导耐药菌株的产生。因此许多国家和组织对TCs残留实施的最大残留值限定(maximum residue limits,MRLs)，如：欧盟规定在肝脏中残留的MRLs为0.3 mg/kg，牛奶或者肌肉中的MRLs为0.1 mg/kg，蜂蜜中的MRLs为0.01 mg/kg，美国食品药管局规定MRLs，在肌肉中为：2 mg/kg，肝脏中为6 mg/kg，牛奶中为0.4 mg/kg，我国规定动物源性食品中四环素抗生素的最大残留量为0.1 mg/kg。因此建立一种快速，经济，准确的检测四环素类药物的残留方法是非常重要的。 近年来，国内外食品分析工作者十分关注四环素类药物残留检测技术，并建立了多种检测方法:微生物法、色谱法，酶联免疫吸附法(ELISA)，化学发光法等。微生物法虽然原理及操作简单，但是测定所花时间太长、灵敏度低、特异性差，目前应用较少；色谱法灵敏度高(0.1-1 ug/L)，准确性好，但样品前处理过程复杂、价格昂贵、分析速度慢等缺点，不适合于现场、快速检测分析；ELISA与化学发光法灵敏度较低，且抗干扰能力差。 电化学发光(ECL)是一种利用电化学技术与化学发光方法相结合的技术。ECL具有装置简单、重现性好、可进行原位(insitu) 检测，且还具有高灵敏度和高选择性等特点，目前相关研究已引起人们极大的兴趣，其中Ru(bpy)32+/TPA为应用最广泛的ECL检测体系之一。崔华研究组研究发现四环素与土霉素可以抑制Ru(bpy)32+/TPA电化学发光，但从文献中可知其方法检测限还未达到欧盟的规定，也不能按照欧盟的标准检测四环素类药物总量的残留。 本研究将基于TCs能增强Ru(bpy)32+的电化学发光的机理来测定食品中四环素含量。在目前检测TCs的方法中，未见定量限(LOQ)达到10–10 g/mL数量级的报道。 二、研究的基本内容与拟解决的主要问题： 基本内容： ①确定实验条件。包括实验中所用的缓冲溶液、pH值和扫描电压、扫速等。确定各优化条件在实验中的作用，对pH值和缓冲溶液、扫速等决定性条件进行重点优化； ②建立实验方法。在①的基础上，确定最终优化条件，制定实验步骤，测定蜂蜜样品中四环素的总量，并通过数据处理得到该方法的灵敏度、精确度、准确度等数据。 拟解决的主要问题： 优化实验条件，确定适当的缓冲溶液、pH值和扫速，达到可以直接用电化学发光法测定食品中四环素总量的目的，并探究其反应机理。 三、研究的方法与技术路线： 方法： ① 查阅外文文献，结合本实验，拟定出需要优化的条件，主要为缓冲溶液、pH值和扫速。 缓冲溶液：PBS、Na2CO3–NaHCO3、B-R、Tris-Hcl pH值：7、7.5、8、8.5、9 扫速：10 mv/s、30 mv/s 、50 mv/s 、70 mv/s 、100 mv/s 在实验过程中，对缓冲溶液、pH值、扫速进行优化。 ② 根据①的结论，确定各条件对实验结果的影响，制定实验步骤，分别对原始溶液（三联吡啶钌Ru(bpy)32+和缓冲溶液的混合液）、加有原始溶液的四环素标准溶液、蜂蜜标样、蜂蜜加标样品、进行测定，从而得出该方法的灵敏度、精密度、准确度等数据，最终建立本方法。 技术路线： 四、研究的总体安排与进度： 2010年11月 熟悉论文形式、内容，确定内容题目，并向指导教师询问。 2010年12月 查找并阅读有关食品中四环素总量测定方法的文献资料熟悉课题的研究方法。收集各种相关资料，进行分析、研究，完成开题报告书、综述等论文准备工作。 2011年2月 在导师指导下运用电化学发光的分析技术，建立定量分析食品中四环素含量的测定方法。 2011年3月 优化各项实验条件，应用电化学发光法测定蜂蜜中的四环素。针对实验所出现的问题即使得以改进。 2011年4月 总结实验结果，撰写毕业论文。完成论文初稿，请指导老师指正和修改。 2011年5月 论文定稿，打印