卵黄抗体的研究进展【文献综述】.docVIP

毕业论文文献综述 生物技术 卵黄抗体的研究进展 摘要：卵黄抗体(IgY)是从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，它是一种具有较强免疫功能的蛋白质，目前已被广泛应用于动物疾病的诊断及防治。本文对卵黄抗体的形成、性质、作用机理、分离提纯方法及其在检测诊断上和疾病防治方面的应用情况进行了综述，可以预见，随着研究的进一步深入，卵黄抗体的应用将不断扩大。 关键词：卵黄抗体；应用；研究进展 0 引言 卵黄抗体(Egg Yolk Immunoglobauli 简称IgY)指母鸡所产蛋的蛋黄中含有的免疫球蛋白。卵黄抗体的研究始于19世纪末至20世纪初[1]，自1893年Klemperer首次报道鸡蛋中存在抗体以来,人们对卵黄抗体(IgY)的研究越来越多,认识也越来越深入,应用也日益广泛。目前它已被广泛地用于许多疾病,尤其是近几年来,在家禽传染病的防治上得到广泛应用。现阶段在卵黄抗体的形成、生物学特性等方面已研究的比较清楚，并且卵黄抗体作为诊断试剂和防治药物的研究愈来愈受到关注。本文就卵黄抗体的形成、生物学特性、作用机理、提纯方法以及应用等作一综述。 1 卵黄抗体的形成 禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。当机体受到外来抗原刺激后，产生一系列免疫应答反应，法氏囊内的B 细胞分化成为浆细胞，浆细胞分泌大量特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体[2，3]。 2 卵黄抗体的特性 与哺乳动物相比, 产蛋母鸡生产抗体具有快速、成本低、效率高、产量高的特点。有证据表明, 卵黄原抗体对比哺乳动物原抗体有更好的生物学优势[4]。 IgY在结构上类似于哺乳动物的IgG,但在化学结构上有许多不同点。IgY的分子量为180kDa,即67-70 kDa的重链和22-30kDa的轻链，沉降系数为7S，等电点接近5.2[5]。而IgG 分子量为150kDa ,即50 kDa的重链和22～23 kDa的轻链。IgY由于结构中比IgG重链多了一个恒定区,但却没有IgG特有的铰链区,所以IgY的摆动性、柔韧性下降, 但IgY的分子量较IgG大,所以稳定性较高。IgY具有较强的耐热、耐酸能力,在pH4～9 的环境中稳定,在65 ℃下可保持活性24h 以上。与哺乳类IgG相比, IgY有更多的疏水性分子,这恰好使它更适于脂类含量丰富的卵黄环境[6]。 卵黄抗体IgY相对于传统哺乳动物的抗体IgG具有以下优点: （1）IgY不与哺乳动物补体、Fc受体结合，也不与葡萄球菌蛋白A（SPA）或链球菌蛋白G（SPG）结合；IgY 还不与血清中的类风湿因子（RF）结合，因而用IgY 检测可避免假阳性结果，提高免疫学检测的准确性[2]。 （2）产生免疫反应所需的抗原剂量小，由于禽类与哺乳动物在种系发生史上距离较远,IgY抗体与抗原亲和力高,产生有效免疫应答所需的抗原剂量较小,且不易与哺乳动物的免疫球蛋白发生交叉反应[6]。 （3）每个蛋大约含100mg以上的IgY，一个月可达3g，相当于兔子的10-20倍；卵黄中没有其他的Ig，易于提纯[5]。 （4）在实际生产中，动物的采血不仅对动物本身是极大的应激，而且费时、费工，大规模生产是不切实际的，而利用蛋鸡生产抗体要方便的多[1]。 3 卵黄抗体的作用机理 特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；卵黄抗体可黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于肠道黏膜上皮细胞；一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片段含有抗体的可变小肽（Fab）部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进入血液后能与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附易感细胞而失去致病性，而IgY的稳定区（Fe部分）留在肠内[7]。 4 卵黄抗体的分离、提纯方法 卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：2。大部分蛋白质都是脂蛋白质，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄球蛋白（α、β、γ）是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。因此IgY的分离纯化首先需有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋白中分离IgY[4]。 4.1 卵黄抗体的粗提 近二十几年来, 已建立了许多较为高效而经济的方法, 如聚乙二醇沉淀法、氯仿抽提法、水稀释法、辛酸沉淀法(CA法)等。 4.1.1 聚乙二醇（PEG）沉淀法 PEG是非离子型水溶性聚合物,高浓度不引起蛋白质变性,沉淀时间比硫酸铵和乙醇都短,不影响离心处理。该法最早由Polson 报道[17]。一般用PBS或TBS作缓冲液将卵黄液稀释5倍,加入3.5%的PEG 6000或硫酸葡聚糖,10 000r/min 低温离心25min后取上清,可得卵黄抗体粗提物。 4.1.2 氯仿抽提法 Ntakarutimana在15mL的蛋