课件：血清胆红素资料.pptVIP

胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素 【注意事项】 1．BOD浓度的选择 文献报道BOD在反应液中终浓度为0.18～1.14U/ml。国内有些厂家的试剂盒，BOD在反应液中终浓度按标示值计算很高，但反应速度很慢。 2.选择BOD浓度时，可根据所用制品在测定高胆红素血清标本或342μmol/L标准液的反应速度，即能否在5min反应完全而确定。由于测定结合胆红素时反应液pH偏离BOD的最适范围，因此要求BOD有较高的浓度，一般使反应液中终浓度不低于0.5U/ml。 胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素 【注意事项】 3．Hb在1.0g/L以下时，对结果影响不大。每升血清中分别加入维生素C 0.1g、半胱氨酸0.5g、谷胱苷肽0.5g、尿素0.5g、尿酸0.5g、葡萄糖10g、乙碘醋酸1g、白蛋白40g对总胆红素及结合胆红素测定几乎无干扰。每升血清中加L-多巴0.15g、α-甲基多巴0.15g使结果偏低约10%。 4．BOD的最适pH 在pH7.3～9.0之间酶活性的pH曲线变化幅度不大，但最适pH为8.0～8.2。但在测定结合胆红素时，为防止Bu反应，选择pH为4.5，这时样本中mBc、dBc及大部分δ胆红素被氧化；pH低于4.0时，血清样本易发生混浊，严重干扰测定结果；郭健等报道，用枸橼酸盐、磷酸盐、硼酸盐和碳酸盐缓冲液比较时，枸橼酸盐缓冲液 (0.1mol/L，pH5.0)效果最好。 胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素 5．结合胆红素标准品 合成的二牛磺酸胆红素(DTB)为水溶性化合物，可与重氮化氨基苯磺酸直接反应，产生吸收光谱与偶氮胆红素相似的偶氮色素。用J-G法测得的摩尔吸光系数与Bu相同。20世纪80年代后期以来，国外结合胆红素测定大多用DTB作标准品。DTB反应前后的吸收光谱与Bu相似，最大吸收峰也在450～460nm之间。 6．混浊问题Doumas报道，成人黄疸血清或肝素抗凝血浆，反应15min几乎均产生混浊而影响结果。在磷酸盐缓冲液中加入尿素可防止混浊。经电泳证明混浊是因球蛋白及纤维蛋白原沉淀引起。应避免使用肝素抗凝。 7．光对BOD法测定结合胆红素有较大影响。经过蓝光治疗的新生儿黄疽血清，用BOD法测定结合胆红素结果远比J-G法高，属假性增高。新生儿血清在体外经蓝光照射后，用高效液相色谱法(HPLC)未检出结合胆红素，重氮法结果通常保持不变，但BOD法结果显著增高。蓝光照射能产生光胆红素，其在 pH3.7易被BOD氧化。此种假性增高对临床监控新生儿黄疽及鉴别生理性黄疽与初期的病理性黄疽有影响。 胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素 【评价】 1．BOD法特异性高，手工操作简便快速，也适合于自动生化分析仪操作。结合胆红素的BOD法测定，解决了长期以来用重氮反应法测定总胆红素和结合胆红素条件的不同，包括试剂种类和浓度的不同，以及结合胆红素结合胆红素反应时间不同造成测定值变异大的问题，提高了结合胆红素分析的特异性和准确度。 2．本法测定结合胆红素，灵敏度和线性上限均较重氮反应法高。 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析 * 骨髓内血红蛋白前质 过氧化氢酶 过氧化物酶 细胞色素 肌红蛋白 * * * * * * 非结合胆红素通过血液循环运输至肝后，在血窦与清蛋白分离并经DISSE间隙被肝细胞摄取，在肝细胞内与Y,Z两种载体蛋白结合，并被运输至肝滑面内质网的微粒体部分，经葡萄糖醛酸转移酶作用与葡萄糖醛酸结合形成CB.从胆汁中排出。 胆红素进入胃肠道由肠道细菌的脱氢作用变为尿胆原，大部分从粪便排出，变成粪胆素，小部分肠内被吸收，经肝门静脉回流到肝，又变成结合胆红素，形成胆红素的肝肠循环，被重吸收的小部分尿胆原，经肾排出，变为尿胆素。 * * 结合胆红素增高vs非结合胆红素增高 * * * * * * * * * * * * * * * * 机制：1、是由于红细胞在单核-吞噬细胞系统破坏过多，超过肝细胞的摄取转化和排泄能力，2、由于溶血造成贫血、缺氧和红细胞破坏产物的毒性作用，使肝细胞对胆红素的代谢功能降低，造成血清游离胆红素浓度过高所致。 特点：血清TB增加，UCB为主，CB基本正常，可代偿性增加，从胆道排出肠道也增加，尿胆原增加，重吸收回肝的增加，由于缺氧和毒素，肝处理能力变弱，通过肾脏排出的尿胆素增多，无胆红素。通过粪便排出的粪胆素增多，粪便颜色加深。 * * 机制;由于肝细胞受损致肝细胞对胆红素的摄取、结合及排泄功能降低，因而ucb增高。而未受损的肝细胞，任能将UCB转换成CB,CB一部分仍能经毛细胆管从胆道排泄，一部分经已损害或坏死的肝细胞反流入血中；亦可因肝细胞肿胀、汇管区渗出性病变与水肿，使胆汁排泄受阻而反流进入血液循环中