课件：酸奶的制作.pptVIP

有机溶剂 有机溶剂可采用丁酯、丁醇、丙酮、氯仿和甲苯等 采用有机溶剂，例如丙酮、甲苯等使细胞脱水。如将菌体悬浮液慢慢倒入10倍体积预冷至－20℃的丙酮中搅拌，丙酮除能脱水外，还能溶解除去膜上部分脂肪，增大细胞壁的通透性。 EDTA螯合剂：可用于处理G-， 该区域通透性增加 G-的外层膜结构 二价阳离子Ca 2+、Mg 2+与脂多糖和蛋白质的结合 EDTA 大量脂多糖分子脱落 外层膜出现洞穴 内层膜的磷脂来填补 Ca 2+、Mg 2+被螯合 表面活性剂 天然的表面活性剂有胆酸盐和磷脂等 合成的表面活性剂 离子型如十二烷基硫酸钠（SDS，阴离子型）；十六烷基三甲基溴化铵（阳离子型） 非离子型如Triton X-100和吐温（Tween）等 表面活性剂Triton X-100－非离子型清洁剂 其作用部位主要是内膜的双磷脂层。 对疏水性物质有很强的亲和力，能结合并溶解磷脂， Triton X-100常与其它试剂混合使用。 变性剂：常用的是盐酸胍、脲。 一般认为胍能与水中氢键作用削弱溶质分子的疏水作用，从而使疏水性化合物溶于水溶液（盐酸胍能从大肠杆菌膜碎片中溶解蛋白）。 盐酸胍不仅能改变细胞通透性，而且能溶解不溶性重组蛋白（包含体），并在其它试剂配合下，使其二硫键断裂，变性解离为亚单位。除去变性剂和杂蛋白后，在一定条件下恢复肽链或肽链间的二硫键，再折叠复性成有活性的蛋白质结构。 目前实验室应用较多的是变性剂盐酸胍和脲处理E. coli基因工程菌，渗透出重组蛋白质。 复合试剂 根据不同试剂的作用机理，将介质试剂合理搭配使用，能有效的提高胞内物质的释放率。 如：单独用0.1M的胍处理E. coli，可释放1％的胞内蛋白，用0.5% Triton X-100可释放4％胞内蛋白，二者结合使用，在同样时间内可使53％的胞内蛋白释放。 一般认为胍溶解细胞外膜，使内膜暴露于Triton X-100中，双磷脂层遭受损失，结果大大改变细胞通透性。 原理 细胞类型 变性剂 清洁剂 溶剂 酶 抗生素 生物试剂 螯合剂 G- x x x x x x G+ x x x 酵母 x x x x x x 植物细胞 x x x x 巨嗜细胞 xx x x 不同细胞化学渗透的处理方法 化学渗透法的优缺点（与机械法比较） 1)优点 ①对产物释放有一定的选择性。 化学试剂处理使一些分子量小的溶质（如肽和小分子的酶蛋白）透过，而分子量大的物质（如核酸）则被阻滞在胞内 控制条件可有选择的释出位于细胞不同部位的产物。 ②细胞外形保持完整，碎片少，有利于后分离。 ③核酸释出量少，浆液粘度低，便于进一步提取。 2)缺点 ①时间长，效率低。 一般胞内物释放率不超过50％，处理试剂2h以上，往往还需要添加还原剂（如巯基乙醇）作保护，以防活性损伤太多。 通常为提高收率而采用较高的实际浓度，如一般用6M的盐酸胍或8M的脲来处理E.coli. ②化学试剂的加入，常会给随后产物的纯化带来困难，并影响最终产物纯度。如表面活性剂存在常会影响盐析中蛋白质的沉淀和疏水层析，因此必须注意除去。 ③通用性差，某种试剂只用于某些特定类型的细胞。 化学法容易引起活性物质失活破坏，因此应根据生化物质的稳定性来选择合适的化学试剂和操作条件。 2、 酶解法 定义—利用酶促反应分解细胞壁上的键而达到细胞破碎的过程 原理 外源性酶解—溶菌酶、糖苷酶（β-1,4、 β –1,6）、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、蛋白水解酶、α-淀粉酶、纤维素酶、脂酶等 内源性酶解（自溶）——温度、pH、时间、缓冲液浓度、激活剂等 酶选择性的催化细胞壁反应，不破坏细胞内的其它物质。 溶菌酶是应用最多的酶，它能专一地分解细胞壁上糖蛋白分子的β一l，4糖苷键，使脂多糖解离，经溶菌酶处理后的细胞移至低渗溶液中使细胞破裂。 溶菌酶适用于革兰氏阳性菌细胞壁的分解。对于革兰氏阴性菌需辅以EDTA。 真核细胞的细胞壁需采用不同的酶。 蜗牛酶适于酵母细胞的处理 自溶作用 通过调节温度、pH或添加有机溶剂，诱使细胞产生溶解自身的酶的方法也是一种酶溶法，称为自溶。 自溶作用是酶解的另一种方法 微生物代谢过程中，大多数都能产生一种能水解细胞壁上聚合结构的酶，以便使生长过程进行下去。 改变微生物的环境，可以诱发产生过剩的这种酶或激发产生其它的自溶酶，以达到自溶目的。 应用：用酶溶法剥离细胞壁，将原生质体进行融合，细胞工程常用的方法。 酶溶法处理细胞存在的问题： ①存在酶产物的抑制问题，使胞内物质释放率降低。 ②酶价高，限制了大规模应用。目前仅用于实验室规模。 ③通用性差，不同的菌株用不同的酶。 3、 渗透压法 渗透压冲击是较温和的一种破碎方法 将细胞放在高渗透压的介质中（如一定浓度的甘油或蔗糖溶液），达到平衡后