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7．高效液相色谱法 7.1 高效液相色谱的主要类型及选择 7.2 高效液相色谱仪 7.3 高效液相色谱基本理论与实验技术 7.4 实验 通过第六章的学习，我们大家知道，气相色谱是一种良好的分离分析技术，对于占全部 有机物约 20%的具有较低沸点且加热不易分解的样品具有良好的分离分析。但是，对沸点高、 相对分子质量大、受热易分解的有机化合物、生物活性物质以及多种天然产物（它们约占全 部有机物的 80%），又如何分离分析呢？实践证明如果用液体流动相去替代气体流动相，则可 达到分离分析的目的，对应的色谱分析方法就称之为液相色谱法。事实上 1906年，俄国植物 学家  Tswett  为了分离植物色素发明的色谱就是我们所谓的液相色谱，但柱效极低，直到  20  世纪 60年代后期，将业已比较成熟的气相色谱的理论与技术应用于经典液相色谱，经典液相 色谱才得到了迅速的发展。填料制备技术的发展，化学键合型固定相的出现，柱填充技术的 进步以及高压输液泵的研制，使液相色谱实现了高速化、高效化，产生了具有现代意义的高 效液相色谱，而具有真正优良性能的商品高效液相色谱仪直到 1967年才出现的。 高效液相色谱 （HPLC）还可称为高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱或现 代液相色谱，与经典液相（柱）色谱法比较，HPLC  能在短的分析时间内获得高柱效和高分 离能力，具体比较如表 7­1所示。 表 7­1 高效液相色谱法与经典液相 （柱）色谱法的比较 方法 高效液相色谱法 经典液相（柱）色谱法 项目 色谱柱：柱长/cm  10~25  10~200  柱内径/mm  2~10  10~50  固定相粒度：粒径/um  5~50  75~600  筛孔/目  2500~300  200~30  色谱柱入口压力/Mpa  2~20  0.001~0.1  2  4  色谱柱柱效/ （理论塔板数/m）  2×10 ~5×10  2~50  ­6  ­2  进样量/g  10 ~10  1~10  分析时间/h  0.05~1.0  1~20  高效液相色谱分析法与气相色谱分析法一样，具有选择性高、分离效率高、灵敏度高、 分析速度快的特点，但它恰好能适于分析气相色谱分析法不能分析的高沸点有机化合物、高 分子和热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质，弥补了气相色谱分析法的不足。这两 种方法的比较如表 7­2所示。 7­ 1  表 7­2 高效液相色谱法与气相色谱法的比较 方法 高效液相色谱法 气相色谱法 项目 进样方式 样品制成溶液 样品需加热气化或裂解 1、液体流动相可为离子型、极性、弱极性、非