苯肼诱发建立斑马鱼血栓模型的方法.pdf

Feb.2015,35(1) 实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative Medicine 1 doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2015.01.001 苯肼诱发建立斑马鱼血栓模型的方法 张 勇, 朱晓宇, 郭胜亚, 李春启 (杭州环特生物科技有限公司, 浙江杭州 311231) [摘要] 目的 建立操作便捷、快速、稳定的活体斑马鱼血栓模型。方法 研究不同浓度苯肼诱 导下斑马鱼血栓形成情况。以2dpf (days post fertilization, dpf, 受精后天数)健康AB 系野生型斑马 鱼作为实验动物, 将其暴露于不同浓度(0.5 mmoL/L、1 mmoL/L、2 mmoL/L、4 mmoL/L、8 mmoL/L) 的苯肼中, 同时设置空白对照组(胚胎养殖用水)和溶剂对照组(0.1% 乙醇), 处理一段时间后, 通过 观察斑马鱼尾静脉血流及血栓形成情况进行定性分析, 利用邻联茴香胺染色法对心脏红细胞染色 强度进行定量分析。结果 苯肼处理组(模型组)有血栓形成，与溶剂对照组相比有显著性差异 (P0.001)。血栓形成率先增高后逐渐减缓, 0.5 mmoL/L、1 mmoL/L 血栓形成较少, 血栓形成率分别为 (19.79 ±1.55)%、(43.28 ±1.82)%、2 mmoL/L 、4 mmoL/L 、8 mmoL/L 均诱发较为严重的血栓, 血 栓形成率分别为(69.85 ±1.12)%、(70.56 ±4.60)% 和(72.25 ±2.11)%，三组间没有差异。结论 苯 肼浓度2 mmoL/L 为诱发稳定的活体斑马鱼血栓模型的最佳浓度。 [关键词] 斑马鱼; 模型; 苯肼; 血栓 [中图分类号] Q95-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-5817(2015)02-0000 随着人类生活环境和膳食习惯的变化，心、 87%, 由于斑马鱼幼鱼通体透明, 血细胞在心脏和血 脑血管病的发病率和死亡率正逐年增高。血栓性疾 液循环系统的堆积非常容易观察，因而利用斑马鱼 [3] 病是一种常见心脑血管病，其主要病症是血管内腔 模型研究心脏畸形及血栓形成也极为方便 。本文 狭窄与闭塞引发。如何对血栓性疾病进行有效的诊 采取通过化学药物苯肼诱导活体斑马鱼形成血栓， 断、预防和治疗，已为国内外普遍重视。在血栓 建立可靠、快速、高效、高性价比的血栓模型。 性疾病研究过程中，已经建立了许多动物血栓模 1 材料与方法 型，但小鼠等哺乳动物模型普遍存在着实验操作复 杂、实验周期长以及实验成本高等问题，因此建 1.1 实验动物 立操作便捷、快速、可靠，且与临床病理生理机 实验所用斑马鱼为AB 系野生型斑马鱼，取自 制相似的血栓动物模型对于抗栓药物的研究是十分 杭州环特生物科技有限公司。斑马鱼的养殖与繁殖 [1] 必要的 。斑马鱼模型用于新药筛选始于 1990 年 参照 Westerfield[4] 的方法。每次交配准备 4～5 对 代 ，斑马鱼作为一种新的模式动物 ，由于其快 成年斑马鱼，平均每对能产 200 ～300 个胚胎。在 速 、经济、预测性好、可比度高等特点，在发 受精后 6 h(即 6 hpf, hours post fertilization)和 24 hpf 育、遗传、免疫、肿瘤和毒理等诸多研究领域中 对胚胎进行清理(移除已死亡胚胎) ，并根据胚胎的 [2] 被广泛