建立梨离体叶片不定芽高效再生及基因转化体系的研究-植物学专业论文.docxVIP

、，’601652 、， ’601652 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研 究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导i帮助和做出重要 贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本 人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规 定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质 本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可 以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：盘-缉华 导师签名：力、l京熙． 日 期：!!!盐：6．j‘ 坐查壅、业盔兰堡主兰丝堡兰主要英文缩写及中英文对照表 坐查壅、业盔兰堡主兰丝堡兰 主要英文缩写及中英文对照表 缩写 英文名称 中文名称 AS Acetosyringone 乙酰丁香酮 6．BA 6-Benzyladenine 6一苄基嘌呤 Carb Carbenicillin 羧苄青霉素 Cef Cefotaxime 头孢霉素 CH Casein enzymatic hydrolysate 水解酪蛋白 CPPU N一2一chloro一4-pyridyl·N-phenylurea 吡效隆 GUS 13-Glucuronidase B．葡萄糖酸苷酶 IBA Indolebutyfic acid 吲哚一3-丁酸 Kan Kanamycin 卡那霉素 MS Murashige and Skoog medium MS培养基 NAA a-Naphthalenacetic acid 萘乙酸 OD Optical density 光密度 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 rmp Round per minute 转／每分 TDZ Thidiazuron 噻重氮苯基脲 5．溴．4一氯．3．吲哚 x—Gluc 5-Bromo-4一chloro-3-indolyl-8一D-glucuronide 一B—D一葡萄糖酸苷 ZT Zeatin 玉米素 赵瑞华：建立梨离体叶片不定芽高效再生及基因转化体系的研究中文摘要 赵瑞华：建立梨离体叶片不定芽高效再生及基因转化体系的研究 中文摘要 梨(Pyrtds communis L．)是世界上最重要的作物之一。梨白粉病和火 疫病等真菌病害是世界梨产区广泛发生的病害，感染真菌性病害严重的会 造成树体死亡，因此通过选育抗病品种的途径来解决梨因真菌感染面造成 的问题具有重要的经济意义。本研究的目标就是建立梨离体叶片高效再生 体系，并利用天然的植物转基因系统——根癌农杆菌介导，以梨品种“丰 产”(Fertility)为试材，在绿色组织特异表达的菠菜核酮糖_-2磷酸羧化酶 iDH氧酶的激活酶(Rubisco—activase)启动子(RcAP)驱动下，将抗真菌 Y．硫堇蛋白(Y．thionin)Rs一劝1基因和uidA(gus)基因导入离体叶片， 获得nptII抗性植株，培养新的抗病品种。 试验研究了基本培养基、激素配比、细胞分裂素、生长素、培养基添 加物、蔗糖浓度、pH值及叶龄与接种方式对梨离体叶片不定芽再生的影 响，优化了再生条件，建立起了高效、稳定的离体叶片再生体系。结果表 明，NN69的基本培养基在诱导梨离体叶片再生方面明显优于MS、LE和 C；合适的激素配比及浓度是提高离体组织再生不定芽频率的关键；NAA 比IBA有更强的诱导梨离体叶片再生的活性；外植体的基因型显著影响 不定芽再生，金花和丰产的再生频率较高，可达90％以上；分化培养基中 添加AgN03和CH，能够促进不定芽的再生；黑暗诱导处理也影响再生， 接种后暗处理20d，再生频率最高。在NN69+BA5mg／L+NAA0．3mg／L+ AgN034．5mg／L+CH300ppm+蔗糖3％的培养基上，金花和丰产的再生频率 最高，分别为100％和95-3％。不定芽伸长时改用增殖培养基MS附加 BAlmg／L、IBA0．2mg／L。芽长至约O．5cm时转到含IBA0．3mg／L的生根培 养基上，20天后即可长出白色细长的根，然后将再生苗移栽到砂石中炼 苗，成活率可达85％。 在建立高效的梨离体叶片不定芽再生体系基础上，研究了梨转化过程 中影响转化的诸因素，初步建立了梨的遗传转化系统。优化过程如下：取 新展开的试管苗幼嫩叶片接种于诱导培养基上预培养1d，用携带目的基 些查查些查兰堡主兰竺堡苎因的农杆菌EHAl05浸染30min，然后放置到添加20HM 些查查些查兰堡主兰竺堡苎 因的农杆菌EHAl05浸染30min，然后放置到添加20HM AS的诱导培养 基上共培养3d，除菌后，移入预筛